基于酶和納米顆粒標(biāo)記的熒光淬滅與電化學(xué)免疫分析.pdf

1、發(fā)展簡(jiǎn)便和高靈敏度的分析方法是目前在免疫分析研究領(lǐng)域的一個(gè)重要方面。酶和納米顆粒標(biāo)記的生物分子由于其自身的特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)，在熒光淬滅與電化學(xué)免疫分析方面具有廣泛的應(yīng)用前景，對(duì)它們進(jìn)行研究無(wú)疑可以進(jìn)一步推動(dòng)免疫分析的發(fā)展。在此背景下，本文開(kāi)展了如下工作：
　　 1.提出了一種新型、簡(jiǎn)便、靈敏的基于免疫復(fù)合物分離和納米金熒光淬滅的分析方法。該法是基于典型的對(duì)人IgG “三文治夾心”的非競(jìng)爭(zhēng)異相免疫分析，并利用了納米金標(biāo)記的抗體可以產(chǎn)生熒

2、光淬滅的特性。首先將羊抗人IgG 吸附在微孔板上，接著人IgG 被羊抗人IgG 捕捉結(jié)合，再被納米金標(biāo)記的抗體夾心形成免疫復(fù)合物。然后加入氫氧化鈉和檸檬酸三鈉的混合溶液解離免疫復(fù)合物，將獲得的含有納米金標(biāo)記抗體的溶液進(jìn)行熒光淬滅分析。熒光素在517 nm處激發(fā)的熒光強(qiáng)度與人IgG的濃度成反對(duì)數(shù)線(xiàn)性關(guān)系，其檢測(cè)范圍是10～5000 ng/ml，檢測(cè)下限達(dá)到4.7 ng/ml。同時(shí)通過(guò)可見(jiàn)紫外和電化學(xué)分析分別驗(yàn)證了納米金標(biāo)記的抗體在解離后是

3、否團(tuán)聚以及免疫復(fù)合物是否完全解離。該法的應(yīng)用可以擴(kuò)展至檢測(cè)其他目標(biāo)分子如DNA 鏈和其他抗原，而且在臨床診斷上有著廣闊的應(yīng)用前景。
　　 2.提出了一種以納米金作為電化學(xué)標(biāo)記物的免疫傳感器。在此方法中，包被的抗體首先通過(guò)被動(dòng)吸附而固定在碳糊電極的表面，接著定量結(jié)合抗原和納米金標(biāo)記的抗體形成免疫夾心復(fù)合物。為了檢測(cè)結(jié)合在電極表面的納米金的量，先以電化學(xué)氧化納米金生成AuCl4-離子，然后采用吸附伏安法定量檢測(cè)吸附在電極表面的AuC

4、l4-離子。峰電流與抗原(人IgG)濃度在10～500 ng/ml 范圍內(nèi)成線(xiàn)性關(guān)系，其檢測(cè)下限為4.0 ng/ml。
　　 3.提出了一種基于生物催化金屬沉積和陽(yáng)極溶出伏安檢測(cè)的電化學(xué)信號(hào)放大免疫分析法。抗體首先通過(guò)一層自組裝膜固定在金電極上，通過(guò)免疫夾心反應(yīng)使堿性磷酸脂酶也連接到電極上。堿性磷酸脂酶催化磷酸抗壞血酸脂水解成抗壞血酸，而抗壞血酸則將銀離子還原沉積在蛋白質(zhì)修飾的電極表面。然后通過(guò)電化學(xué)氧化溶出并用陽(yáng)極溶出伏安法來(lái)

5、檢測(cè)沉積下來(lái)的銀。峰電流與人IgG在5～1000ng/ml 范圍內(nèi)呈對(duì)數(shù)線(xiàn)性關(guān)系，檢測(cè)下限為2.2 ng/ml。聯(lián)合運(yùn)用具有高催化活性的酶和靈敏的陽(yáng)極溶出伏安法顯著增加了免疫分析的靈敏度。
　　 4.提出了一種基于生物催化金屬沉積的納米粒子產(chǎn)物繼續(xù)催化沉積金屬的電化學(xué)連續(xù)信號(hào)放大免疫分析法。首先把抗體包被在微孔板上，形成免疫夾心復(fù)合物之后，進(jìn)行生物催化沉積納米銀和銀增強(qiáng)的反應(yīng)步驟。沉積下來(lái)的銀溶解后通過(guò)陽(yáng)極溶出伏安法來(lái)檢測(cè)。對(duì)磷