基于酶和納米顆粒標(biāo)記的熒光淬滅與電化學(xué)免疫分析.pdf

1、發(fā)展簡便和高靈敏度的分析方法是目前在免疫分析研究領(lǐng)域的一個重要方面。酶和納米顆粒標(biāo)記的生物分子由于其自身的特點和優(yōu)勢，在熒光淬滅與電化學(xué)免疫分析方面具有廣泛的應(yīng)用前景，對它們進(jìn)行研究無疑可以進(jìn)一步推動免疫分析的發(fā)展。在此背景下，本文開展了如下工作：
　　 1.提出了一種新型、簡便、靈敏的基于免疫復(fù)合物分離和納米金熒光淬滅的分析方法。該法是基于典型的對人IgG “三文治夾心”的非競爭異相免疫分析，并利用了納米金標(biāo)記的抗體可以產(chǎn)生熒

2、光淬滅的特性。首先將羊抗人IgG 吸附在微孔板上，接著人IgG 被羊抗人IgG 捕捉結(jié)合，再被納米金標(biāo)記的抗體夾心形成免疫復(fù)合物。然后加入氫氧化鈉和檸檬酸三鈉的混合溶液解離免疫復(fù)合物，將獲得的含有納米金標(biāo)記抗體的溶液進(jìn)行熒光淬滅分析。熒光素在517 nm處激發(fā)的熒光強度與人IgG的濃度成反對數(shù)線性關(guān)系，其檢測范圍是10～5000 ng/ml，檢測下限達(dá)到4.7 ng/ml。同時通過可見紫外和電化學(xué)分析分別驗證了納米金標(biāo)記的抗體在解離后是

3、否團(tuán)聚以及免疫復(fù)合物是否完全解離。該法的應(yīng)用可以擴展至檢測其他目標(biāo)分子如DNA 鏈和其他抗原，而且在臨床診斷上有著廣闊的應(yīng)用前景。
　　 2.提出了一種以納米金作為電化學(xué)標(biāo)記物的免疫傳感器。在此方法中，包被的抗體首先通過被動吸附而固定在碳糊電極的表面，接著定量結(jié)合抗原和納米金標(biāo)記的抗體形成免疫夾心復(fù)合物。為了檢測結(jié)合在電極表面的納米金的量，先以電化學(xué)氧化納米金生成AuCl4-離子，然后采用吸附伏安法定量檢測吸附在電極表面的AuC

4、l4-離子。峰電流與抗原(人IgG)濃度在10～500 ng/ml 范圍內(nèi)成線性關(guān)系，其檢測下限為4.0 ng/ml。
　　 3.提出了一種基于生物催化金屬沉積和陽極溶出伏安檢測的電化學(xué)信號放大免疫分析法?？贵w首先通過一層自組裝膜固定在金電極上，通過免疫夾心反應(yīng)使堿性磷酸脂酶也連接到電極上。堿性磷酸脂酶催化磷酸抗壞血酸脂水解成抗壞血酸，而抗壞血酸則將銀離子還原沉積在蛋白質(zhì)修飾的電極表面。然后通過電化學(xué)氧化溶出并用陽極溶出伏安法來

5、檢測沉積下來的銀。峰電流與人IgG在5～1000ng/ml 范圍內(nèi)呈對數(shù)線性關(guān)系，檢測下限為2.2 ng/ml。聯(lián)合運用具有高催化活性的酶和靈敏的陽極溶出伏安法顯著增加了免疫分析的靈敏度。
　　 4.提出了一種基于生物催化金屬沉積的納米粒子產(chǎn)物繼續(xù)催化沉積金屬的電化學(xué)連續(xù)信號放大免疫分析法。首先把抗體包被在微孔板上，形成免疫夾心復(fù)合物之后，進(jìn)行生物催化沉積納米銀和銀增強的反應(yīng)步驟。沉積下來的銀溶解后通過陽極溶出伏安法來檢測。對磷