基于多聚螯合物酶催化放大效應的電化學免疫分析方法研究.pdf

1、本論文采用EnVision試劑為基礎，制備信號探針，進行信號放大。本論文主要從納米金屬標記信號探針的制備、免疫傳感器的構建和信號放大等方面開展了以下三個方面的研究工作：
　　1.基于 EnVision信號探針測定甲胎蛋白的超靈敏電化學免疫傳感器
　　EnVision試劑(EV)是葡聚糖-酶-抗抗體復合物，含有大量的辣根過氧化物酶(HRP)和抗抗體。本文采用EV結合甲胎蛋白第二抗體作為信號探針測定甲胎蛋白。首先，在金電極表面電

2、沉積一層納米金，由于納米金優(yōu)良的特性，可以較好的保持抗體等生物分子的活性。再將硫醇化 G蛋白固定至修飾電極表面，用于定向固定甲胎蛋白抗體，通過抗原-抗體的特異性結合反應在電極界面形成夾心型免疫復合物，制備成一種靈敏的電化學免疫傳感器，并詳細的研究了該電化學免疫傳感器的性能。EV試劑的使用，使得電流響應大大增強，從而提高電化學免疫傳感器的靈敏度和降低它的檢測下限。該免疫傳感器的線性范圍為5~200pg mL-1，線性相關系數(shù)為0.998，

3、檢出下限達到2 pg mL-1(信噪比為3)。將該免疫傳感器用于病人的血清樣品分析，所得結果與ELISA法相對照，兩種方法所測結果相差不大，表明研發(fā)的免疫傳感器在臨床檢測分析具有很大的潛在應用價值。
　　2.基于納米金標記 EnVision信號探針檢測牛奶中己烯雌酚的免溫育電化學免疫傳感器信號放大研究
　　本文研究了一種富酶型檢測己烯雌酚(DES)的電化學免疫傳感器。首先，在電極表面修飾一層聚二烯丙基二甲基氯化銨(PDDA)

4、，PDDA帶正電，能夠很好的與電沉積至電極表面帶負電的納米金通過靜電結合，由此構建免疫傳感器界面。其次，信號探針制備時使用伴刀豆球蛋白A(Con A)，可以在納米金上定向固定 EV，增加信號探針酶的密度，從而進一步放大信號。由于己烯雌酚的對稱結構，采用夾心免疫反應模式，將納米金標記 EV固定至修飾電極表面，形成夾心免疫復合物，測定夾心免疫復合物中 HRP催化過氧化氫(H2O2)對氯化血紅素的氧化還原反應所產生的電流。通過電流的變化量來定

5、量己烯雌酚。由于納米金標記 EV的信號探針上負載有大量的HRP和抗體，大大增強了免疫傳感器的響應信號。該免疫傳感器實現(xiàn)了濃度在5~500 pg mL-1范圍內的高靈敏檢測，分別在低濃度和高濃度呈線性增長，線性相關系數(shù)為0.999，檢測下限達2 pg mL-1(信噪比為3)。該免疫感器用于牛奶樣品分析，檢測結果與ELISA方法相比，具有有很好的相關性，有望應用于牛奶中其它有機污染殘留物的檢測分析。
　　3.基于β-環(huán)糊精修飾電極和納

6、米鉑標記 EnVision信號探針的三重信號放大電化學免疫分析方法研究
　　本文研究了基于β-環(huán)糊精修飾電極的超靈敏電化學免疫傳感器。將納米鉑(PtNPs)和己烯雌酚抗體(DES Ab)共同固定在EV上，制得EV/PtNPs-DES Ab信號探針。β-環(huán)糊精修飾電極用于捕獲 DES，通過夾心免疫反應，將信號探針固定至電極表面。免疫復合物中 PtNPs和 HRP共同催化 H2O2產生氧化還原電流，通過電流變化值來定量 DES。因此，

7、在前一部分實驗的基礎上，進一步構建了一種基于 PtNPs標記 EV信號探針的三重信號放大的電化學免疫傳感器。同樣采用Con A定向固定EV。與前一部分不同的是，PtNPs也具有催化分解H2O2的作用。隨著DES的濃度增加，峰電流增加，線性范圍為1~100pg mL-1，檢出限低至0.3pg mL-1(信噪比為3)。由于PtNPs標記EV信號探針具有信號放大作用，因此，有效提高了免疫傳感器的靈敏度。并且，該免疫傳感器無需溫育，大大縮短了免