雞血藤野生資源調(diào)查及其品質(zhì)與自然生態(tài)因子相關(guān)性研究.pdf

1、雞血藤是一味具有鮮明嶺南特色的活血化瘀類常用藥材，《中國藥典》(2015年版一部)收載其為豆科(Leguminosae)密花豆屬植物密花豆（Spatholobussuberectus Dunn.）的干燥藤莖[1]。具有極高的藥用價值，藥用需求量大，為多種中成藥原料藥。本論文在對雞血藤主產(chǎn)區(qū)（廣東、廣西等地）野生資源調(diào)查的基礎(chǔ)上，開展不同居群種質(zhì)資源的收集鑒定、藥材品質(zhì)分析與評價及其與自然生態(tài)因子的相關(guān)性研究，以摸清其野生資源狀況及生境特

2、征，了解其生長特性與生態(tài)習(xí)性，從而為雞血藤野生轉(zhuǎn)家種技術(shù)研究提供技術(shù)支撐和理論依據(jù)。本文主要研究內(nèi)容如下:
　　第1章文獻綜述
　　在查閱了大量有關(guān)雞血藤野生資源分布及與本研究相關(guān)的文獻資料的基礎(chǔ)上，對雞血藤野生資源分布、化學(xué)成分、藥材質(zhì)量分析、藥理作用、自然生態(tài)因子對藥材品質(zhì)影響等方面的研究進展進行了歸納、整理與總結(jié)。
　　第2章雞血藤野生資源實地考察
　　通過實地調(diào)查以及走訪等方法，開展完成了廣東廣州、深圳、

3、梅州、惠州、韶關(guān)、清遠及廣西賀州等地20余個雞血藤野生居群生態(tài)環(huán)境及種質(zhì)資源的調(diào)查，觀察記錄了每個野生居群的地理位置（經(jīng)緯度、海拔）、種群的數(shù)量特征、伴生物種及所處群落的光照強度、坡度和坡向;采集了土壤樣品及藥材樣品;此外還收集了廣西百色、云南西雙版納州等地野生雞血藤藥材。通過實地調(diào)查，初步摸索清了廣東、廣西兩省雞血藤的野生資源及栽培基地的狀況，了解了雞血藤野生生境地的特征[2]。目前廣東、廣西兩省的野生種群破壞較為嚴(yán)重，種群更新較慢。

4、
　　第3章雞血藤藥材質(zhì)量分析與評價
　　1、不同居群雞血藤藥材質(zhì)量分析比較
　　按照《中國藥典》（2015年版一部）附錄XA法及紫外-可見分光光度法測定了雞血藤藥材醇溶性浸出物及總黃酮含量，并采用HPLC法分別測定了不同居群雞血藤藥材指標(biāo)性成分原兒茶酸、兒茶素、表兒茶素、芒柄花素和染料木素的含量。對不同居群（藤莖粗度約為5-8cm）雞血藤藥材進行質(zhì)量分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)廣東、廣西及云南產(chǎn)區(qū)不同野生居群樣品中此五種指標(biāo)性成分

5、的含量差異明顯，不同居群藥材質(zhì)量差異較大;對不同居群相同環(huán)紋數(shù)（3環(huán)）雞血藤藥材的總黃酮及五種指標(biāo)性成分含量進行主成份分析并計算綜合得分發(fā)現(xiàn)梅州梅縣雞血藤藥材質(zhì)量最優(yōu)，惠州、韶關(guān)、廣西產(chǎn)地雞血藤質(zhì)量次之，廣州、深圳兩地雞血藤質(zhì)量排名最后;對栽培品4、7、9、10年生雞血藤藥材進行質(zhì)量分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)并非生長年限越長各化學(xué)成分含量便越高，總黃酮、表兒茶素、兒茶素含量變化幅度較大，芒柄花素、染料木素含量變化較小。采用HPLC法測定了不同居群相

6、同環(huán)紋數(shù)（3環(huán)）雞血藤藥材指紋圖譜，用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件》（2010版）計算相似度，結(jié)果顯示，廣東省內(nèi)清遠、韶關(guān)、梅州及惠州等地各居群樣品的相似度較高（均在0.85以上），廣西與廣東惠州地區(qū)的相似度亦較高;廣州、深圳等地不同居群雞血藤及云南西雙版納州與兩廣地區(qū)的雞血藤的相似度都很低。
　　2、同一植株不同樹脂環(huán)紋數(shù)血藤質(zhì)量分析研究
　　分別按照《中國藥典》（2015年版一部）附錄XA法及紫外-可見分光光度法

7、測定了雞血藤藥材醇溶性浸出物及總黃酮含量，并采用HPLC法分別測定了指標(biāo)性成分原兒茶酸、兒茶素、表兒茶素、芒柄花素、染料木素的含量。對同一植株不同環(huán)紋數(shù)雞血藤藥材進行質(zhì)量分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn):同一植株不同部位藤莖（具有不同的樹脂環(huán)紋數(shù)）中兒茶素與表兒茶素的含量變化較為明顯，但變化趨勢基本一致。二者的含量在不同居群來源樣品中的變化趨勢則不相同。同一植株不同部位藤莖中芒柄花素與染料木素的含量變化差異較小，且具有較為一致的變化趨勢。二者的含量在不同

8、居群來源樣品中的變化趨勢亦較為相同。原兒茶酸含量在同一植株的不同部位中及不同居群中的含量均具有較為明顯的變化趨勢。同一植株不同部位藤莖中總黃酮含量隨著樹脂環(huán)紋數(shù)的增加呈較為平緩的上升趨勢，而在6環(huán)以上的藥材中則略微有所下降;三個不同居群的醇溶性浸出物測定結(jié)果顯示，醇溶性浸出物的含量隨著環(huán)紋數(shù)的增加先升高，在3環(huán)時含量相對較高，后有的呈下降趨勢，有的先降后升，也有的變化較為平緩。
　　3、雞血藤藥材不同環(huán)紋部位質(zhì)量分析探討
　

9、　分別照《中國藥典》（2015年版一部）附錄XA法及紫外-可見分光光度法測定了雞血藤不同環(huán)紋環(huán)紋部位樣品中醇溶性浸出物及總黃酮含量，并采用HPLC法分別測定了指標(biāo)性成分原兒茶酸、兒茶素、表兒茶素的含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)醇溶性浸出物、總黃酮、兒茶素及表兒茶素在不同環(huán)紋部位中的含量，由內(nèi)而外（最外一輪除外）基本上呈先上升后下降的趨勢，其中浸出物與表兒茶素的含量在中間部位的樣品中升降波動幅度稍大，而總黃酮與兒茶素含量波動幅動較為平緩。大部位樣品在3-

10、5輪時的含量基本上達最高，后則逐漸下降，而最內(nèi)一輪的含量均較低。
　　4、雞血藤地上與地下部分藥材質(zhì)量分析探討
　　采用紫外-可見分光光度法測定了雞血藤不同環(huán)紋環(huán)紋部位樣品中測定了雞血藤不同部位（根與莖，地上與地下）藥材總黃酮含量，并采用HPLC法分別測定了指標(biāo)性成分原兒茶酸、兒茶素、表兒茶素、芒柄花素、染料木素的含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)各化學(xué)組分含量在不同部位間有一定的差異，總黃酮含量地上部分比地下部分少，根含量少于莖含量;兒茶素、

11、表兒茶素、芒柄花素、染料木素含量均是地下部分大于或等于地上部分，原兒茶酸在不同居群中地上、地下部分含量有一定的差異性。
　　第4章雞血藤質(zhì)量與自然生態(tài)因子的相關(guān)性分析研究
　　1、土壤養(yǎng)分與雞血藤質(zhì)量相關(guān)性分析研究
　　測定土壤pH以及有機質(zhì)、全氮、全磷、全鉀、水解氮、有效磷、速效鉀、有效硼、有效鉬、有效銅、有效鋅、有效鐵、有效錳、有效鈣、有效鎂含量，用spss17.0軟件對各土壤養(yǎng)分含量與不同居群雞血藤相同環(huán)紋數(shù)各化

12、學(xué)組分（總黃酮、原兒茶酸、兒茶素、表兒茶素、芒柄花素、染料木素）含量進行主成份分析法與多變量逐步回歸分析。分析結(jié)果顯示:
　　全鉀對總黃酮的含量幾乎沒有影響;全磷、有效鉬、水解氮、有效鐵對總黃酮含量的影響很小;有效鎂、土壤pH對總黃酮含量有很大的促進作用;速效磷、有效銅、有效鋅對總黃酮含量有很大的抑制作用。
　　全磷、全氮、有機質(zhì)、全鉀、有效鉬、有效鋅、有效錳、有效鐵對兒茶素含量影響很小;有效鎂、土壤pH、有效鈣對兒茶素含量

13、有很大的促進作用;速效磷、有效硼、水解氮、有效銅對兒茶素有一定的抑制作用。
　　有效鐵對表兒茶素含量幾乎沒有影響;有機質(zhì)、全磷、全鉀、水解氮、有效硼、有效鉬、有效鋅、有效錳對表兒茶素含量的影響很小;有效鎂、土壤pH、有效鈣對表兒茶素含量有很大的促進作用;速效磷、有效銅對表兒茶素有一定的抑制作用。
　　有機質(zhì)、全氮、全鉀對芒柄花素含量影響很小;全磷、有效鉬對芒柄花素含量有很大的促進作用，有效銅、有效鈣次之;有效鋅對芒柄花素含量

14、有明顯的抑制作用，有效錳次之。
　　有效硼對染料木素含量幾乎沒有影響;土壤pH、有機質(zhì)、全氮、水解氮、速效鉀、有效錳對染料木素含量影響很小;有效鉬對染料木素有明顯的促進作用，有效銅、全鉀次之;有效鋅、有效鈣對染料木素有明顯的抑制作用，有效鎂、速效磷次之。
　　2、氣候生態(tài)因子與雞血藤質(zhì)量相關(guān)性分析研究
　　以市為單位收集各產(chǎn)地主要氣候資料，用spss17.0軟件對氣候因子與相同環(huán)紋數(shù)雞血藤各化學(xué)組分含量進行偏相關(guān)分析。

15、結(jié)果表明:總黃酮含量與平均日照時數(shù)呈顯著性正相關(guān)，與極端最低溫度、年平均降雨量呈顯著性負相關(guān);兒茶素含量與各氣候因子的相關(guān)性不大，只與平均日照時數(shù)呈一定的正相關(guān)，其余均是負相關(guān);平均日照時數(shù)與表兒茶素含量呈正相關(guān)，極端最高溫度與年平均降雨量與表兒茶素含量呈顯著性負相關(guān)。
　　第5章結(jié)語
　　1、廣東省內(nèi)雞血藤野生種群主要分布在粵北、粵東北、粵中及粵西部分地區(qū)的山區(qū)縣。廣西主要分布于其南部地區(qū)的山地林中。云南主要分布于云南南部

16、地區(qū)。雞血藤主要分布于亞熱帶常綠闊葉林或次生毛竹林的中下層，一般沿著水源豐富的山溝兩側(cè)山坡地生長，野生居群內(nèi)少見實生幼苗群，伴生物種較為豐富。不同野生居群的藥材性狀特征具有一定的差異性。雞血藤栽培產(chǎn)區(qū)主要分布于廣東梅州及廣西賀州等地，栽培模式有單品種種植和仿野生栽培兩種。
　　2、以醇溶性浸出物、總黃酮及指標(biāo)性成分原兒茶酸、兒茶素、表兒茶素、芒柄花素和染料木素等為作含量測定指標(biāo)，并研究分析相應(yīng)樣品的HPLC指紋圖譜，系統(tǒng)開展了不同

17、居群、不同樹脂環(huán)紋數(shù)及不同環(huán)紋部位等藥材品質(zhì)的綜合分析與評價工作。不同居群雞血藤中上述各指標(biāo)的含量測定結(jié)果表明，不同居群雞血藤藥材的質(zhì)量差異較大，醇溶性浸出物含量均達到了現(xiàn)行版《中國藥典》入藥要求;五個指標(biāo)性成分中以表兒茶素和兒茶素的含量相對較高，建議將表兒茶素和兒茶素的含量測定納入雞血藤質(zhì)量控制體系(表兒茶素含量≧1.5mg/g，兒茶素含量≧0.9mg/g);原兒茶酸、芒柄花素及染料木素可作為雞血藤藥材質(zhì)量控制與評價的參考指標(biāo)。不同居

18、群具有相同樹脂環(huán)紋數(shù)的雞血藤藥材主成份分析結(jié)果顯示梅縣雁洋鎮(zhèn)及惠州地區(qū)各居群的雞血藤質(zhì)量較優(yōu)，而廣州從化、深圳、韶關(guān)及賀州的質(zhì)量相對較差。結(jié)合各居群資源調(diào)查結(jié)果，綜合分析來看，群落生態(tài)環(huán)境未受破壞及種群保存完好的的雞血藤樣品質(zhì)量較優(yōu)，而遭受砍伐與破壞后恢復(fù)的野生種群的質(zhì)量相對較差。HPLC指紋圖譜研究結(jié)果顯示地理位置的遠近對雞血藤次生代謝產(chǎn)物的種類組成有一定的影響。
　　3、具有不同偏心性樹脂環(huán)紋數(shù)的雞血藤中醇溶性浸出物、總黃酮、

19、兒茶素及表兒茶素的含量差異較大，且與樹脂環(huán)紋數(shù)間沒有一定變化規(guī)律;染料木素與芒柄花素含量在不同環(huán)紋數(shù)雞血藤中的差異較小。雞血藤斷面樹脂環(huán)紋數(shù)的多少不能用于評價雞血藤藥材品質(zhì)好壞的依據(jù)。
　　4、雞血藤皮部、髓部及木質(zhì)部中化學(xué)組分含量相對較低，次生代謝物質(zhì)主要集中于樹脂環(huán)紋部位。
　　5、土壤養(yǎng)分中的有效鈣、有效鎂、土壤pH對總黃酮、兒茶素、表兒茶素含量影響有著明顯的促進作用，有效鉬、有效銅對芒柄花素、染料木素含量有著明顯促進

20、作用;速效磷、有效銅對總黃酮、兒茶素、表兒茶素含量影響有著明顯的抑制作用，有效鋅對芒柄花素、染料木素含量有著明顯抑制作用;全鉀、有效鐵、全磷對總黃酮、兒茶素、表兒茶素含量影響很小，有機質(zhì)、全氮對芒柄花素、染料木素含量影響很小。總黃酮含量與平均日照時數(shù)呈顯著性正相關(guān)，與極端最低溫度、年平均降雨量呈顯著性負相關(guān);兒茶素含量與各氣候因子的相關(guān)性不大，只與平均日照時數(shù)呈一定的正相關(guān)，其余均是負相關(guān);平均日照時數(shù)與表兒茶素含量呈正相關(guān)，極端最高溫