大腸桿菌感光雙組分系統(tǒng)的構(gòu)建.pdf

1、雙組分系統(tǒng)是普遍存在于細(xì)菌中的信號傳導(dǎo)系統(tǒng)，它主要由兩部分構(gòu)成:組氨酸激酶(HK)和反應(yīng)調(diào)控蛋白(RR)，組氨酸激酶屬于跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，可以感受外界的信號并進(jìn)行自磷酸化，隨后將磷酸基團(tuán)傳遞給相應(yīng)的反應(yīng)調(diào)控蛋白RR，活化的反應(yīng)調(diào)控蛋白可以結(jié)合到相應(yīng)的啟動子區(qū)域，啟動下游基因的表達(dá)。不同的雙組分系統(tǒng)能夠感受不同的外界信號，為了系統(tǒng)的研究細(xì)菌中的雙組分系統(tǒng)，我們利用了光遺傳的技術(shù)來重構(gòu)組氨酸激酶，將感光基因Cph1的感光片段與組氨酸激酶的保守的

2、組氨酸激酶結(jié)構(gòu)域連接起來，形成感光的融合蛋白，從而使重構(gòu)的雙組分系統(tǒng)能夠感受紅光，用光信號代替原有的信號。
　　感光組氨酸激酶的表達(dá)是雙載體的表達(dá)系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)中我們通過篩選得到了8種雙組分系統(tǒng)的感光融合體系(UhpB-UhpA，PhoR-PhoB，YedV-YedW，RstB-RstA，GlrK-GlrR，CusS-CusR，PhoQ-PhoP和CpxA-CpxR)。為了進(jìn)一步的應(yīng)用，我們對UhpB-UhpA這組感光雙組分系統(tǒng)進(jìn)行了