嗜熱厭氧乙醇桿菌——大腸桿菌穿梭載體的構建.pdf

1、嗜熱菌是指一類能夠在 55 ℃以上溫度下正常生長和繁殖的細菌群體。本研究以嗜熱厭氧乙醇桿菌 Thermoanaerobacter ethanolicus JW 200 為研究對象，構建嗜熱厭氧乙醇桿菌-大腸桿菌穿梭載體。
　　 嗜熱厭氧乙醇菌是一種專性厭氧、嗜高溫的革蘭氏陽性菌，能廣泛地以廉價的淀粉、木聚糖等已糖和戊糖為底物進行發(fā)酵，產(chǎn)生以乙醇為主的代謝產(chǎn)物。由于它具有工業(yè)生產(chǎn)乙醇的潛力，國際上對嗜熱厭氧乙醇菌菌株JW200與3

2、9E均有深人研究。但是該菌遺傳轉化系統(tǒng)的缺少，制約了對該菌應用領域和理論基礎的進一步研究。
　　 本文先對已經(jīng)構建好的穿梭質(zhì)粒 pTE16 進行改造，通過替換篩選標記上原有的啟動子以期在嗜熱菌中能穩(wěn)定存在。再通過引入大腸桿菌的組成型啟動子使該篩選標記在大腸桿菌中發(fā)揮作用。在大腸桿菌中，對重組質(zhì)粒進行氯霉素抗性實驗，結果僅能在氯霉素濃度為 10μg/ml的培養(yǎng)基中生長。同時，對 pHsh 進行改造，將其上的σ 70 專門識別的標準