二甲雙胍通過抑制RORγt對2型糖尿病大鼠IL-17的影響.pdf

1、2型糖尿病作為一種慢性代謝性疾病，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，涉及環(huán)境與遺傳兩大方面，胰島素分泌不足及胰島素抵抗是其發(fā)病的關(guān)鍵因素。相關(guān)研究表明，2型糖尿病不僅是一種代謝性疾病，也是一種亞臨床炎癥疾病，其發(fā)病機(jī)制與慢性低度炎癥密切相關(guān)，因此提出2型糖尿病的炎癥學(xué)說。
　　大量研究證明，炎性因子、促炎性因子與T2DM密切相關(guān)，但其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。近年來研究發(fā)現(xiàn)，IL-17與2型糖尿病、1型糖尿病、高血壓及代謝綜合征均有一定的相關(guān)性。IL-

2、17是一種促炎細(xì)胞因子，具有強(qiáng)大的招募中性粒細(xì)胞、促進(jìn)多種細(xì)胞釋放炎性因子、促進(jìn)細(xì)胞增值及抑制腫瘤生長等多種生物學(xué)作用，可導(dǎo)致炎癥反應(yīng)、自身免疫性疾病等發(fā)生和發(fā)展。而IL-17也是一種重要的炎癥介質(zhì)，它可以誘導(dǎo)其他炎癥細(xì)胞如IL-6、TNF-α等的表達(dá)，產(chǎn)生致炎作用。大量研究證實(shí)，無論體外還是體內(nèi)，Th17分化IL-17細(xì)胞都需要RORγt的參與，證實(shí)RORγt是Th17細(xì)胞分化的關(guān)鍵正向轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。在活化T細(xì)胞中RORγt高表達(dá)可產(chǎn)

3、生大量的IL-17，并且RORγt基因敲除小鼠體內(nèi)TH17細(xì)胞和IL-17明顯減少。
　　二甲雙胍于20世紀(jì)進(jìn)入臨床應(yīng)用，大量循癥醫(yī)學(xué)證據(jù)顯示其有良好的降糖作用，且安全性及效價(jià)比均高，目前許多權(quán)威的糖尿病指南把二甲雙胍推薦為治療2型糖尿病的一線首選藥物。近年來一些研究顯示其除了降糖作用外同時(shí)具有抗炎作用，然而其抗炎作用機(jī)制仍未完全闡明。
　　2材料和方法:
　　2.1分組及飼喂方法
　　SPF級SD雄性大鼠50只

4、，體重為89.62±7.42g。適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后，隨機(jī)分為2組，一組20只，一組30只，分別飼喂普通飼料、高脂高糖飼料，在第8周末時(shí)腹腔注射STZ，使用STZ+高脂高糖飼樣聯(lián)合造模，以30mg/kg STZ腹腔注射造模，3天后測空腹血糖，將空腹血糖大于11mmol/L視作為造模成功。將造模組隨機(jī)分為3組，每組10只，一組繼續(xù)飼喂高脂高糖（M組），一組飼喂高脂高糖+二甲雙胍（M+MET組），一組飼喂高脂高糖+胰島素(M+INS);普通飼料

5、組隨機(jī)分為2組，每組各10只，一組飼喂普通飼養(yǎng)(C)，一組飼喂普通飼料+二甲雙胍(C+MET)。MET按200mg/Kg劑量灌胃，不給予MET的大鼠使用生理鹽水灌胃。整個實(shí)驗(yàn)共持續(xù)12周。
　　2.2觀察指標(biāo)
　　(1)全自動血標(biāo)本分析儀檢測血糖濃度及胰島素含量，計(jì)算胰島素抵抗指數(shù);
　　(2) ELISA法檢測血清中IL-17的表達(dá)水平;
　　(3) Western blotting法檢測RORγt蛋白的表達(dá)水

6、平;
　　(4) RT-PCR法檢測RORγt mRNA基因的表達(dá);
　　(5)免疫組化觀察脾臟組織中RORγt及IL-17陽性細(xì)胞因子的表達(dá)。
　　3結(jié)果:
　　3.1 HOMA-IR
　　各組大鼠HOMA-IR水平之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=163.923，P=0.000)。M組、M+INS組和M+MET組的HOMA-IR均比C組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。M+INS組、M+MET組的HOMA

7、-IR均比M組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.2血清IL-17的表達(dá)水平
　　各組大鼠血清平均IL-17水平之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=59.778，P=0.000)。進(jìn)一步兩兩比較，M組、M+INS組、M+MET組的IL-17水平均高于C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。M+MET組的IL-17水平低于M組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。C+MET組的IL-17水平低于M+MET組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

8、(P＜0.05)。M+INS組的IL-17水平高于M+MET組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。C組的IL-17水平與C+MET組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。M組的IL-17水平與M+INS組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.3大鼠HOMA-IR與IL-17水平的相關(guān)性分析
　　M組，HOMA-IR與血清IL-17水平呈正相關(guān)，r=0.718，P=0.019;M+MET組，HOMA-IR與血清IL-17水平

9、呈正相關(guān)，r=0.706，P=0.022。
　　3.4各組大鼠脾臟組織RORγt mRNA的表達(dá)
　　各組大鼠脾臟組織平均RORγt mRNA水平之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=910.176，P=0.000)。進(jìn)一步兩兩比較，M組、M+INS組、M+MET組的RORγt mRNA水平均高于C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。M+MET組的RORγt mRNA水平低于M組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。C+MET組的RO

10、RγtmRNA水平低于M+MET組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。M+INS組的RORγtmRNA水平高于M+MET組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。C組的RORγt mRNA水平與C+MET組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。M組的RORγt mRNA水平與M+INS組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.5各組大鼠脾臟組織RORγt蛋白的表達(dá)
　　各組大鼠脾臟組織平均RORγt蛋白表達(dá)水平之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

11、意義(F=505.668，P=0.000)。進(jìn)一步兩兩比較，M組、M+INS組、M+MET組的RORγt蛋白水平均高于C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。M+MET組的RORγt蛋白水平低于M組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。C+MET組的RORγt蛋白水平低于M+MET組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。M+INS組的RORγt蛋白水平高于M+MET組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。C組的RORγt蛋白水平與C+MET組

12、相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。M組的RORγt蛋白水平與M+INS組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.6各組大鼠脾臟組織IL-17與RORγt的免疫組化表達(dá)水平
　　M組較M+INS組、M+MET組、C組、C+MET組的脾臟組織中IL-17及RORγt細(xì)胞陽性比均高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4結(jié)論:
　　(1)2型糖尿病大鼠的血清中IL-17及脾臟組織RORγt的表達(dá)水平升高。