野生丹參微生物資源及其對(duì)毛狀根的誘導(dǎo)效應(yīng).pdf

1、丹參（salviae miltiorrhizae）是唇形科鼠尾草屬的多年生草本植物，廣泛用于心血管疾病的治療。有效提升丹參活性成分的含量是目前丹參種植的目標(biāo)之一，微生物對(duì)植物生長(zhǎng)和次生代謝物合成具有促進(jìn)作用。本論文研究了野生丹參植株中的微生物對(duì)丹參毛狀根生長(zhǎng)和次生代謝的誘導(dǎo)效應(yīng)，以為生產(chǎn)中提高丹參品質(zhì)提供新思路。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴系統(tǒng)分析了多地區(qū)多生境的野生丹參微生物資源并重點(diǎn)研究了它們對(duì)丹參次生代謝的影響。分離了7個(gè)不

2、同地區(qū)的丹參微生物，共1022株，鑒定了240株，它們屬于63種細(xì)菌及7種真菌;多數(shù)細(xì)菌歸屬于Pseudomonas、Bacillus、Acinetobacter、rthrobacter、Rhizobium和Sphingobium等屬，真菌歸屬于Aspergillus、Purpureocillium、Aspergillus、Mucor、Hypocrea和Trichoderma等屬。研究微生物對(duì)丹參毛狀根藥用活性成分的影響，發(fā)現(xiàn)一些細(xì)菌促

3、進(jìn)丹酚酸的合成;多數(shù)試驗(yàn)真菌顯著促進(jìn)丹參酮的合成。顯著促進(jìn)丹酚酸合成的細(xì)菌包括Pantoea dispersa14DSR23、Pseudomonas chlororaphis subsp.aurantiaCaHYR1、 Pseudomonas chlororaphis subsp.aurantiaCaHYR26、Pseudomonas chlororaphis subsp.piscium SCR22和Pseudomonas chloro

4、raphissubsp.aureofaciens LNHR13，誘導(dǎo)后丹酚酸B(SAB)的含量為對(duì)照組的1.21-2.28倍，誘導(dǎo)后迷迭香酸(RA)的含量為對(duì)照組的1.38-2.50倍;顯著促進(jìn)丹參酮合成的真菌有Aspergillus japonicus L74、Purpureocillium lilacinum R75、Aspergillus insuetus R77、Mucor irregularis R78、Hypocrea ni

5、gricans S79、Aspergillus japonicus S80、Trichoderma atroviride S81，此外還有部分細(xì)菌Pseudomonas sp.DS3G2、HYR1、Pseudomonas vancouverensis DS6，誘導(dǎo)后的總丹參酮含量為對(duì)照組1.62-10.14倍。促進(jìn)總酚酸合成效果最好的菌株是細(xì)菌LNHR13，促進(jìn)總丹參酮合成效果最好的是真菌L74，同時(shí)顯著促進(jìn)兩類(lèi)成分合成的是細(xì)菌DS3G

6、2、HYR1和DS6。⑵分析了菌株LNHR13促進(jìn)丹酚酸合成的主要活性成分。菌株LNHR13發(fā)酵液的水溶性成分以及多糖成分對(duì)毛狀根的鮮重有顯著的促進(jìn)作用，同時(shí)顯著促進(jìn)丹參素鈉、RA和SAB三類(lèi)丹酚酸及總丹酚酸的合成?；贕C-MS，從LNHR13的水溶性成分中鑒定出植物生長(zhǎng)激素（IAA）、水楊酸(SA)和玉米素(t-ZOG)，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)促進(jìn)丹酚酸積累的菌株均含有豐富的植物激素，其中含量最高的為IAA(559.182-71543.05

7、ng/mL)，含量次高的為SA(28.86-379.21 ng/mL)和t-ZOG(33.619-88.027ng/mL)。采用外源IAA和SA驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，IAA和SA均可促進(jìn)丹參毛狀根的生長(zhǎng)，SA顯著促進(jìn)丹酚酸的合成。驗(yàn)證LNHR13中的胞外多糖對(duì)丹參毛狀根的誘導(dǎo)作用，發(fā)現(xiàn)該胞外多糖顯著促進(jìn)丹酚酸的合成，其最佳濃度為20mg/L和40mg/L，誘導(dǎo)時(shí)間為9d。⑶研究了活體菌株LNHR13對(duì)丹參毛狀根的誘導(dǎo)效應(yīng)。活菌均抑制毛狀根的生長(zhǎng)和丹