CT X線照射所致大鼠腦損傷后血腦屏障通透性改變與EBA及VEGF表達的關(guān)系.pdf

1、目的：
　　本研究探討CT X線照射所致大鼠血腦屏障（blood-brain barrier，BBB）損害條件下內(nèi)皮屏障抗原（endothelial barrier antigen，EBA）及血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）陽性表達的動態(tài)變化規(guī)律，并分析照射前后血腦屏障通透性變化規(guī)律與EBA及VEGF表達變化規(guī)律的關(guān)系，為臨床治療放射性腦損傷的早期血管病變提供重要的

2、參考。
　　方法：
　　1.實驗動物的準備：選用清潔級成年健康的雄性 SD大鼠72只，體質(zhì)量210-230g，實驗前大鼠均飼養(yǎng)在恒定濕度，溫度22±2℃環(huán)境下，自由攝食和飲水，自然晝夜節(jié)律采光，飼養(yǎng)一周。
　　2.大鼠放射性腦損傷模型的制作：隨機選取24只大鼠，采用隨機數(shù)表法分為假手術(shù)組和放射性腦損傷組，其中放射性腦損傷組隨機分為傷后7d，14d，28d三個亞組，每組6只；大鼠用20％烏拉坦（5 mL/kg）腹腔注射麻

3、醉后，使用16排螺旋 CT對大鼠大腦進行局部照射來制作大鼠放射性腦損傷模型，照射區(qū)域為大鼠顱骨人字縫和冠狀縫之間的區(qū)域（使用特制鉛模具遮蓋大鼠其他不需要照射的區(qū)域），假手術(shù)組大鼠麻醉后不給予照射處理。通過檢測放射性敏感蛋白來確定模型的成功制作。
　　3.指標的檢測：隨機選取24只大鼠，采用隨機數(shù)表法分為假手術(shù)組和放射性腦損傷后7d、14d、28d四組，每組6只（損傷組造模方法同上）。于觀察前1h按照3 mL/kg的劑量經(jīng)尾靜脈注射

4、3%伊文思藍，開顱并暴露腦皮質(zhì)血管，使用微循環(huán)顯微鏡在體觀察腦皮質(zhì)微血管的通透性，并通過微循環(huán)顯微成像系統(tǒng)記錄視野（×400），使用Image-proplus6.0醫(yī)學圖像分析軟件檢測血管外伊文思藍的累積光密度值（integrated optical density，IOD），以此作為BBB的通透性指標；隨機取24只大鼠，用同樣的方法分組造模后，采用免疫組化染色的方法檢測腦皮質(zhì)EBA和VEGF的表達水平，在400倍光鏡下選取皮質(zhì)區(qū)域視野

5、進行拍照記錄，染成棕黃色的細胞為陽性細胞，使用Image-proplus6.0醫(yī)學圖像分析軟件檢測EBA和VEGF陽性染色的IOD。
　　4.相關(guān)性分析：采用Pearson相關(guān)性分析法將伊文思藍外滲水平分別和EBA及VEGF表達水平做相關(guān)性分析。
　　結(jié)果：
　　1.放射性腦損傷后7d、14d、28d檢測到放射性敏感蛋白如神經(jīng)膠原纖維酸性蛋白（GFAP）、S100B蛋白出現(xiàn)規(guī)律性改變（由同門師兄師姐報告，在此不做陳述）

6、，證明使用CT X線制造大鼠放射性腦損傷模型的成功。
　　2.假手術(shù)組伊文思藍大部分局限在血管內(nèi)，只有少量滲出。經(jīng)CT X線照射后7d伊文思藍出現(xiàn)明顯外滲現(xiàn)象，將血管外區(qū)域染成藍色，然后在傷后14d至28d外滲現(xiàn)象逐漸降低，但均高于假手術(shù)組。
　　3.采用免疫組化染色的方法檢測各組腦皮質(zhì)EBA及VEGF的表達水平，結(jié)果顯示，和假手術(shù)組相比 EBA表達水平于傷后7d明顯降低，然后在傷后14d和28d逐漸恢復(fù)，但均低于假手術(shù)組；

7、VEGF表達水平于傷后7d明顯升高，然后在傷后14d和28d逐漸恢復(fù)，但均高于假手術(shù)組。
　　4.伊文思藍外滲水平與EBA表達水平呈負相關(guān)，與VEGF表達水平呈正相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.本次實驗我們采用CT X線制造大鼠放射性腦損傷模型，造模方法先進新穎，簡便易行，可重復(fù)性高，具有較好的臨床模擬性。
　　2.使用伊文思藍結(jié)合微循環(huán)顯微攝像系統(tǒng)在體觀察并檢測了傷后 BBB通透性改變,使用伊文思藍作為示蹤劑在體分