水產(chǎn)品中多種重金屬污染物的聯(lián)合毒性及化學(xué)拮抗機(jī)制研究.pdf

1、目的：近年來，重金屬污染的健康危害已經(jīng)成為我國亟待研究解決的衛(wèi)生問題。目前重金屬毒性的研究主要是針對(duì)單一重金屬毒性，而對(duì)實(shí)際攝入的多種重金屬的聯(lián)合毒性研究較少。通過體外實(shí)驗(yàn)探討多種抗氧化劑/絡(luò)合劑對(duì)水產(chǎn)品中常見重金屬污染物鉛、鎘、汞、銅、鋅、錳、鉻、鎳之間的聯(lián)合毒性作用及化學(xué)拮抗機(jī)制，為防治環(huán)境中多種重金屬的聯(lián)合毒性提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：基于前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定八種常見重金屬混合污染物和三種抗氧化劑/絡(luò)合劑的濃度，重金屬混合物劑

2、量分為LC25，LC50，LC75組，三種抗氧化劑/絡(luò)合劑分為五個(gè)濃度梯度，分別為處理組 M8+1、M8+2、M8+3、M8+4、M8+5，通過體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)，采用MTT實(shí)驗(yàn)比較三種不同的抗氧化劑/絡(luò)合劑對(duì)八種常見重金屬混合污染物細(xì)胞毒性的拮抗或抑制作用，并觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；熒光素酶實(shí)驗(yàn)檢測(cè)正常小鼠上皮 J B細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子 NF-κB的表達(dá)情況；采用蛋白免疫印跡法檢測(cè)正常人肝HL7702細(xì)胞中各種信號(hào)蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)

3、果：在一定的重金屬混合物染毒劑量下（LC25，LC50，LC75），給予不同濃度的抗氧化劑/絡(luò)合劑進(jìn)行干預(yù)。染毒24h后，隨著不同的抗氧化劑/絡(luò)合劑濃度的升高，在一定劑量范圍內(nèi)，細(xì)胞生存活力得到明顯恢復(fù)，特別在高劑量重金屬混合物濃度（LC75）時(shí)，細(xì)胞的生存率明顯上升。經(jīng)普通光學(xué)倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)發(fā)現(xiàn)通過給予不同劑量的抗氧化劑/絡(luò)合劑進(jìn)行干預(yù)后，細(xì)胞形態(tài)逐漸恢復(fù)正常。經(jīng)熒光素酶檢測(cè)試驗(yàn)測(cè)定發(fā)現(xiàn)，重金屬混合污染物可以使 JB6細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)

4、錄因子 NF-κB的表達(dá)水平上調(diào)，而三種抗氧化劑/絡(luò)合劑能夠下調(diào) NF-κB的表達(dá)水平。八種常見重金屬混合污染物可以引起HL7702細(xì)胞凋亡、致癌和氧化應(yīng)激系統(tǒng)的有關(guān)的基因信號(hào)如COX-2、Akt、p-Akt、NF-κB、Fas、Bax、Nrf2、HO-1和 NQO1等蛋白的表達(dá)上調(diào)，絡(luò)合劑乙二胺四乙酸二鈉鈣（EDTA2NaCa）、抗氧化劑還原性谷胱甘肽（GSH）、抗氧化劑茶多酚這三種抗氧化劑/絡(luò)合劑則可以使相應(yīng)的基因的信號(hào)蛋白表達(dá)水平

5、下調(diào)。
　　結(jié)論：八種常見重金屬混合污染物可以引起細(xì)胞凋亡、致癌和氧化應(yīng)激系統(tǒng)的有關(guān)基因的信號(hào)蛋白表達(dá)上調(diào)，絡(luò)合劑 EDTA2NaCa、抗氧化劑 GSH、抗氧化劑茶多酚這三種抗氧化劑/絡(luò)合劑則可以使相應(yīng)的基因信號(hào)的蛋白表達(dá)水平下調(diào)，還能夠明顯的緩解八種重金屬混合污染物的細(xì)胞毒性，提高細(xì)胞的生存率，使細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子 NF-κB的表達(dá)水平下調(diào)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，這三種抗氧化劑/絡(luò)合劑在一定的劑量條件下，能緩解多種重金屬引起的細(xì)胞氧化應(yīng)激