魚藤酮皮膚吸收后對大鼠腦部神經(jīng)遞質(zhì)的影響及巴戟天保護作用的研究.pdf

1、本研究的目的是采用透皮給藥法建立帕金森（Parkinson’s disease，PD）病模型，并與腹腔注射給藥法建模后的大鼠進行比較。以行為學(xué)、免疫組織化學(xué)、生物化學(xué)指標(biāo)作，研究魚藤酮透皮給藥后藥物濃度對大鼠腦部神經(jīng)遞質(zhì)的影響；以及中藥巴戟天對魚藤酮損傷的大鼠神經(jīng)保護作用。
　　本研究的行為學(xué)指標(biāo)采用體重檢測、姿態(tài)穩(wěn)定性實驗、前肢力量實驗、第一步啟動時長實驗、自主站立實驗方法進行研究。免疫組織化學(xué)指標(biāo)是對腦部紋狀體酪氨酸羥化酶（T

2、yrosine Hydroxylase，TH）與黒質(zhì)致密部（Substantia Nigra compacta，SNc）α-突觸蛋白的表達進行研究。生物化學(xué)指標(biāo)采用腦部微透析對大鼠的腦部神經(jīng)遞質(zhì)進行采樣，并使用高效液相色譜儀-電化學(xué)檢測器（HPLC-ECD）對二羥苯乙酸（Dihydroxy phenyl acetic acid，DOPAC）、多巴胺（Dopamine，DA）、高香草醛（Herpes virus ateles，HVA）三種

3、神經(jīng)遞質(zhì)進行含量測定，比較透皮給藥與腹腔注射給藥后神經(jīng)遞質(zhì)變化的異同；比較巴戟天給藥后神經(jīng)遞質(zhì)的變化，研究其對腦神經(jīng)的保護作用。
　　主要結(jié)果如下：
　　1、行為學(xué)指標(biāo)結(jié)果：
　　魚藤酮2.5 mg/d組（低劑量組）、魚藤酮5.0 mg/d組（中劑量組）、魚藤酮10.0 mg/d組（高劑量組）大鼠在魚藤酮透皮給藥30d后，與對照組分別進行組間兩兩比較：體重檢測結(jié)果顯示，低、中、高三個劑量組的體重分別為357.13±21

4、.33 g、358.73±12.20 g、339.77±27.92 g，與空白對照組體重（367.7±20.56 g）相比，均無明顯變化（P>0.05）；但均顯著高于注射對照組（9.15±0.05 g，P<0.01）。姿態(tài)穩(wěn)定性結(jié)果顯示：低、中、高三個劑量組的跨步距離分別為8.73±0.05 cm、8.47±0.12 cm、7.13±0.05 cm，均較空白對照組（6.6±0.08 cm）顯著降低（P<0.01），且高劑量組顯著低于注射

5、對照組（37.50±0.50 cm，P<0.01）。前肢力量結(jié)果顯示：低、中、高三個劑量組的板與地面夾角分別為34.67±1.25°、31.00±2.16°、31.33±1.25°，較空白對照組（41.00±0.82°）顯著降低（P<0.01）；且中、高劑量組顯著低于注射對照組（37.50±0.50°，P<0.01）。第一步啟動時長結(jié)果顯示：低、中、高劑量組的時長分別為10.83±2.27 s、12.90±2.22 s、14.40±0.

6、82 s，與空白劑量組（6.60±0.57 s）相比顯著延長（P<0.01）；與注射對照組（9.90±0.01s）相比無明顯差異（P>0.05）。自主站立次數(shù)結(jié)果顯示：低、中、高劑量組分別為19.67±3.77次、21.67±4.03次、21.67±3.40次，與空白對照組（24.3±2.87次）和注射對照組（15.0±2.00次）相比，均無明顯差異（P>0.05）。結(jié)果顯示，魚藤酮給藥30 d后，皮膚給藥組隨著魚藤酮劑量的增大，大鼠的

7、姿態(tài)穩(wěn)定性、前肢力量逐漸減弱，第一步啟動時長逐漸升高。
　　2、免疫組織化學(xué)指標(biāo)結(jié)果：
　　30 d給藥后，低、中、高劑量組TH免疫組化組織切片平均光密度結(jié)果分別為0.133±0.001、0.151±0.005、0.126±0.005，與空白對照組（0.185±0.004）相比，光密度均顯著降低（P<0.01）；與腹腔對照組（0.131±0.004）相比，高、中劑量組的平均光密度值顯著降低（P<0.01）。魚藤酮10.0 m

8、g/d透皮20d組（0.147±0.003）、30d組（0.120±0.005）與0 d組（0.184±0.004）相比，平均光密度均顯著降低（P<0.01），10 d組（0.172±0.005）差異較弱（P<0.05）。結(jié)果顯示透皮給藥組大鼠的TH表達量均明顯低于正常大鼠。此外，病理組織切片結(jié)果顯示，各處理組SNc中均出現(xiàn)α-突觸蛋白聚合體。
　　3、生物化學(xué)指標(biāo)結(jié)果
　　大鼠透皮單次給藥：大鼠皮膚單次給藥（劑量為10 m

9、g/d/只），其24h內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)在240 min時變化明顯，兩種神經(jīng)遞質(zhì)DOPAC和HVA均降低，分別從0.88±0.09μg/mL降至0.33±0.13μg/mL，0.65±0.21μg/mL降至0.52±0.13μg/ml；而DA不降反升，從0.40±0.11μg/mL升至0.46±0.24μg/ml。（DOPAC+HVA）/DA的比值從給藥前3.78±2.35下降至1.84±1.56，并于240 min后趨于平穩(wěn)。
　　大鼠

10、透皮多次給藥：魚藤酮透皮給藥30 d后，低、中、高劑量組細胞外液中DA濃度分別為：0.57±0.02μg/mL、0.49±0.06μg/mL、0.72±0.01μg/mL，與空白對照組（0.49±0.14μg/mL）和注射對照組（0.47±0.07μg/mL）相比無明顯差異。DOPAC濃度分別為：0.77±0.11μg/mL、0.68±0.10μg/mL、1.58±0.15μg/mL，其中僅有高劑量組較空白對照組（0.58±0.11）升

11、高（P<0.05），且也明顯高于注射對照組（0.33±0.39，P<0.01）。HVA濃度分別為：1.50±0.14μg/mL、0.98±0.17μg/mL、1.39±0.15μg/mL，與空白對照組（0.45±0.05μg/mL）和注射對照組（0.30±0.07μg/mL）相比，低、高劑量組明顯較高（P<0.01），而中劑量組則差異性較弱（P<0.05）。多巴胺代謝系數(shù)(DOPAC+HVA)/DA顯示，僅有高劑量組（4.33±0.43

12、）與空白對照組（2.28±0.74），注射對照組（1.43±0.16）存在顯著差異（P<0.05），而其余劑量組與空白對照組和注射對照組想比均無明顯差異。
　　魚藤酮10 mg/d透皮給藥10 d組的DA細胞外液濃度（2.40±0.67μg/mL）要顯著高于0 d組（0.49±0.14μg/mL），而20 d（0.33±0.02μg/mL）、30 d組（0.72±0.01μg/mL）則與0 d組無明顯差異。另外，DOPAC和HVA

13、方面僅有30 d組（DOPAC:1.56±0.17μg/mL，HVA：1.39±0.16μg/mL）與0 d組（0.58±0.11μg/mL，0.45±0.05μg/mL）相比存在明顯差異（P<0.01），其余組與0 d差異不明顯。10d組多巴胺代謝系數(shù)(DOPAC+HVA)/DA（0.43±0.22）要明顯低于0 d組（2.28±0.74，P<0.01）；僅有30 d（7.50±0.25）組比0 d組較高（P<0.05），呈現(xiàn)明顯的D

14、A代謝紊亂。
　　4、巴戟天對魚藤酮神經(jīng)損害的保護作用研究結(jié)果
　　與空白對照組分別進行組間兩兩比較，10.0 g/d組的DA（0.94±0.02μg/mL）明顯高于空白對照組（0.49±0.14，P<0.01），而其余組與空白對照組差異不明顯。與0.0 g/d相比，三個劑量組的DA均明顯較高(P<0.01)。而DOPAC和HVA方面，2.0 g/d組（DOPAC:0.13±0.08μg/mL，HVA：0.23±0.01μg

15、/mL）、10.0 g/d組（DOPAC:0.23±0.04μg/mL，HVA：0.28±0.016μg/mL）與空白對照組（DOPAC:0.58±0.11μg/mL，HVA：0.45±0.05μg/mL）和0.0 g/d組（DOPAC:1.58±0.15μg/mL，HVA：1.39±0.15μg/mL）相比，均存在明顯差異（P<0.01），而6.0 g/d組（DOPAC:0.40±0.01μg/mL，HVA：0.38±0.04μg/m

16、L）較空白對照組顯著性較弱（P<0.05），較0.0 g/d組較強（P<0.01）。10.0 g/d組和2.0 g/d組(DOPAC+HVA)/DA分別為：0.55±0.14、1.06±0.17，顯著低于0.0 g/d組（2.68±0.67）和空白對照組（2.28±0.74），而6.0 g/d組（2.11±0.36）與0.0 g/d組相比差異性較弱（P<0.05），與空白對照組相比差異性較強（P<0.01）。
　　本研究顯示，魚藤