微小RNA-21、RNA-155與蛋白OPN、TGFBI在膀胱尿路上皮癌中的診斷及臨床意義的研究.pdf

1、背景：膀胱癌（bladder cancer）是最常見的泌尿系腫瘤之一。據(jù)我國據(jù)腫瘤登記中心數(shù)據(jù)顯示，2008年全國膀胱癌發(fā)病率高達(dá)7.49/10萬，其中城市男性發(fā)病率最高（13.07/10萬），而國際標(biāo)化發(fā)病率僅為4.53/10萬，數(shù)據(jù)也顯示膀胱癌是我國男性發(fā)病率最高的泌尿生殖惡性腫瘤。膀胱尿路上皮癌（bladder urothelial carcinoma，BUC）占膀胱癌的百分之九十以上，經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切（transurethra

2、l resection of bladder tumor，TURBT）術(shù)后復(fù)發(fā)率較高，1年復(fù)發(fā)率達(dá)15-61％，5年高達(dá)31-78%。由于膀胱尿路上皮癌有較高復(fù)發(fā)率，需要長期監(jiān)測、治療必然會給患者帶來較大的經(jīng)濟壓力。因此，對于膀胱尿路上皮癌更需要一種有效的方法或技術(shù)來及時診斷和監(jiān)測，爭取最佳的治療時期，減少膀胱尿路上皮癌進一步進展，降低患者的經(jīng)濟壓力。膀胱鏡檢查、尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查是膀胱尿路上皮癌診斷的經(jīng)典方法。膀胱鏡檢查具有較高的敏感性

3、及特異性，但具有創(chuàng)傷性、存在并發(fā)癥的可能，如泌尿系感染、疼痛、出血等，長期檢查也會帶來較高的花費；尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查在診斷NMIBC時具有較高的特異性為86-90%，但敏感性較低，通常為33-48%，并且低級別的NMIBC中其準(zhǔn)確度低于60%。目前，美國食品與藥品管理總局（the Food and Drug Administration，F(xiàn)DA）已批準(zhǔn)核基質(zhì)蛋白22（nuclear Matrix Protein22。NMP22）、膀胱腫瘤

4、抗原（bladder tumor antigen，BTA）及ImmunoCyt/uCyt+應(yīng)用于臨床診斷膀胱癌，但容易受到其他因素的影響，假陽性率很高，暫不能取代膀胱鏡檢查被推薦應(yīng)用于臨床工作。因此，需要新的生物標(biāo)志物來診斷、監(jiān)測膀胱尿路上皮癌。microRNA（miRNA，miR）是一種非編碼的微小RNA分子，通常由18-24個核苷酸組成，可與信使RNA的C端非翻譯區(qū)結(jié)合，在蛋白表達(dá)過程中起到轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)作用。文獻(xiàn)顯示miRNA分子穩(wěn)定

5、存在組織、血液、尿液等樣本中，而血液及尿液中的miRNA分子可作為疾病診斷及預(yù)后的非侵入性標(biāo)志物。本實驗將利用這一點探索血清及尿液中miR-21、miR-155分子在膀胱尿路上皮癌的表達(dá)情況，尋找特異性強、靈敏度高的生物標(biāo)志物。血清、尿液中檢測蛋白質(zhì)的含量是臨床疾病診斷的經(jīng)典方法，如PSA診斷前列腺癌。骨橋蛋白（Osteopontin。OPN）及轉(zhuǎn)化生長因子β誘導(dǎo)蛋白（beta transforming growth factor-in

6、duced，TGFBI）是兩種在膀胱尿路上皮癌中高表達(dá)的蛋白，通過閱讀文獻(xiàn)懷疑其可能在膀胱尿路上皮癌血清、尿液中異常表達(dá)。本實驗利用酶聯(lián)免疫吸附測定法（enzyme1inked immunosorbent assay，ELISA）探索OPN及TGFBI在膀胱尿路上皮癌患者血清及尿液中的含量，進一步分析與臨床病理學(xué)的關(guān)系，及對膀胱尿路上皮癌診斷的臨床應(yīng)用價值。
　　目的：⑴解miR-21、miR-155、OPN、TGFBI在不同組別

7、血清、尿液標(biāo)本中表達(dá)的差異性；⑵了解miR-21、miR-155、OPN、TGFBI在膀胱尿路上皮癌不同分期及分級患者血清、尿液標(biāo)本中表達(dá)的差異性；⑶根據(jù)血清、尿液中miR-21、miR-155、OPN、TGFBI檢測結(jié)果，探討血清及尿液兩者單獨或聯(lián)合診斷膀胱尿路上皮癌的敏感性及特異性。
　　方法：①利用RT-PCR的方法分別檢測膀胱尿路上皮癌患者、泌尿系良性疾病患者及健康志愿者三組血清、尿液樣本中miR-21、miR-155的表

8、達(dá)量；②利用雙抗體夾心ELISA法分別檢測膀胱尿路上皮癌患者、泌尿系良性疾病患者及健康志愿者三組血清、尿液樣本中OPN、TGFBI的表達(dá)量；③利用受試者工作特征曲線（ROC）及曲線下面積（AUC）判斷血清及尿液中miR-21、miR-155、OPN、TGFBI水平對膀胱尿路上皮癌患者的診斷價值。
　　結(jié)果：⑴膀胱尿路上皮癌組血清、尿液miR-21相對表達(dá)量均高于良性疾病組、健康對照組（P<0.01），后兩者相比也具有統(tǒng)計學(xué)意義（P

9、<0.05），血清miR-21相對表達(dá)量與患者的肌層浸潤、病理級別、有無轉(zhuǎn)移之間相關(guān)（P<0.01），而與患者的年齡、性別無關(guān)（P>0.05）；尿液miR-21僅與病理級別（P<0.01）、有無轉(zhuǎn)移（P<0.05）之間相關(guān)；血清、尿液miR-21對膀胱尿路上皮癌診斷的敏感性分別為90.0%、82.5%，特異性分別為80.0%、76.7%；⑵膀胱尿路上皮癌組血清miR-155相對表達(dá)量均高于泌尿系良性疾病組、健康對照組，有統(tǒng)計學(xué)差異（P<

10、0.01），后兩者相比也具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），而尿液中miR-155相對表達(dá)量僅高于健康對照組（P<0.05），其他組之間相比無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；血清miR-155相對表達(dá)量與患者的肌層浸潤、有無轉(zhuǎn)移之間相關(guān)（P<0.05），而與患者的病理級別、年齡、性別無關(guān)（P>0.05）；尿液miR-155僅與患者的有無轉(zhuǎn)移之間相關(guān)（P<0.05）；血清miR-155對膀胱尿路上皮癌診斷的敏感性分別為82.5%、62.5%，特異

11、性分別為63.3%、73.3%；⑶膀胱尿路上皮癌組血清、尿液中OPN的表達(dá)均顯著高于泌尿良性疾病組與健康對照組（P<0.01），后兩者之間并無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），血清OPN表達(dá)量與患者的肌層浸潤、病理級別、有無轉(zhuǎn)移之間相關(guān)（P<0.05），而與患者的年齡、性別無關(guān)（P>0.05）；但尿液OPN與臨床病理特征無關(guān)，血清及尿液OPN對膀胱尿路上皮癌診斷的敏感性分別為90.0%、77.5%，特異性分別為80.0%、80.0%；⑷膀胱尿

12、路上皮癌組血清、尿液中TGFBI的表達(dá)顯著高于泌尿良性疾病組（P<0.05）與健康對照組（P<0.01），但后兩者之間并無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），血清、尿液TGFBI表達(dá)量與患者的肌層浸潤、病理級別、有無轉(zhuǎn)移、年齡、性別無關(guān)（P>0.05）；血清、尿液TGFBI對膀胱尿路上皮癌診斷的敏感性分別為65.0%、67.5%，特異性分別為70.0%、76.7%。
　　結(jié)論：miR-21、miR-155、OPN、TGFBI在膀胱尿路上皮