糖原磷酸化酶同工酶BB在小型豬心肌缺血模型變化趨勢分析.pdf

1、背景：心血管并發(fā)癥，特別是圍手術期心肌梗死是非心臟手術后死亡的主要原因。隨著外科手術量不斷增加，圍手術期心肌損傷在臨床實踐中越來越常見。因為超過80％的圍手術期心肌損傷患者并沒有明顯的臨床癥狀，大部分圍手術期心肌損傷并沒有明確診斷處理，此外它不明顯的表現(xiàn)導致醫(yī)生和大眾對其認識有限。盡管圍手術期心肌損傷在很大程度上是沒有癥狀的，它使得手術后30天患者死亡率增加近10倍。手術中患者處于鎮(zhèn)靜睡眠狀態(tài)，在很大程度上掩蓋了缺血性心肌損害的臨床癥狀

2、，而手術所致軀體不適也會影響我們對心血管癥狀的甄別。因此加強圍術期心血管系統(tǒng)監(jiān)護，檢測心肌缺血的早期敏感指標，可以提高心血管事件檢出率以及評估冠狀動脈再灌注水平。
　　目的：生物標志物作為常規(guī)臨床檢驗的一部分可以很容易地檢測。糖原磷酸化酶同工酶腦型（glycogen phosphorylaseBB,GPBB）為糖原分解的關鍵酶,在心肌細胞肌漿網構成糖原分解復合物,該復合物對缺血引起的糖原分解特別敏感，使其構成發(fā)生改變,形成可溶性G

3、PBB,透過細胞膜進入血液，適于臨床急診測定。本研究通過分析GPBB在小型豬急性心肌缺血模型中動態(tài)變化趨勢，特別是3小時之內的連續(xù)血清濃度變化，評估GPBB在心肌損傷中的診斷價值。
　　方法：健康雄性巴馬系香豬（體重25±5kg）外科手術結扎冠狀動脈，制作小型豬心肌損傷壞死模型。本實驗設計了缺血再灌注組和缺血無灌注組。GPBB主要存在于與腦和心肌組織，肌肉組織為糖原磷酸化酶同工酶肌型（glycogen phosphorylase,

4、GPMM），因此開胸手術冠狀動脈結扎之后不同時間點測到的GPBB是由心肌細胞釋放，而排除手術引起的肌肉損傷所致，所以本實驗沒有設置假手術組，而是在冠狀動脈結扎前設置一次采血，記作0h，便于結扎后各時間點與其對照。選取巴馬系香豬30頭，隨機分為兩組，缺血1小時再灌注6小時（I1h-R6h）組20頭，缺血7小時（I7h）組10頭。在全身麻醉下，監(jiān)測血壓、五導聯(lián)心電圖、脈搏氧飽和度，打開胸腔，充分暴露心臟，結扎左前降支中下三分之一處。術中I1

5、h-R6h組結扎1小時松開結扎線，開放血流，I7h組持續(xù)結扎，同時觀察心電圖變化。小型豬生命體征平穩(wěn)時，逐層關閉胸腔，麻醉復蘇。開胸后，結扎前采血一次，記作0h，結扎時刻之后0.5h、1h、2h、3h、5h和7h共計7個時間點進行靜脈采血，每次3-5ml，離心取上清并立即放入-80℃冰箱凍存，血清送往醫(yī)院檢驗科由固定檢驗醫(yī)師檢測 cTnI濃度，用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定 GPBB濃度。7h后，麻醉處死動物，立即取出心臟。用冰冷的

6、磷酸鹽緩沖液（PhosphateBufferedSaline，PBS）沖洗干凈，放入-40℃冰箱中冰凍1 h，待心肌變硬后取出，垂直于心臟長軸，自心尖向心底切成2mm厚的切片，浸沒于1%的2，3，5-氯化三苯基四氮唑( triphenyltetrazolium chloride，TTC)磷酸鹽緩沖液中，放入37℃恒溫水浴箱30 min后取出，數(shù)碼相機拍照。
　　結果：⑴成功建立小型豬心肌缺血模型。I1h-R6h組20頭，2頭死于術

7、中室顫，1頭死于氣道梗阻導致的窒息缺氧。I7h組10頭，1頭術中室顫，1頭術后死亡。⑵心電圖改變，結扎后ST段下降，繼而上升，呈現(xiàn)典型心肌缺血表現(xiàn)。⑶TTC染色后，正常心肌呈玫瑰紅色，梗死心肌呈蒼白色。驗證心梗模型建立成功。⑷兩組小型豬血清 cTnI濃度在不同時相變化趨勢不同（P<0.001）。兩組之間比較有統(tǒng)計學差異（P<0.001）。和0h相比，I1h-R6h組2h肌鈣蛋白明顯升高（P<0.05）， I7h組3h后緩慢升高，5h有統(tǒng)

8、計學差異（P<0.05）。⑸兩組小型豬血清GPBB濃度在不同時相變化趨勢不同（P<0.001）。兩組之間比較沒有差異（P>0.05）。和0h相比，I1h-R6h組1h明顯升高，有統(tǒng)計學差異（P<0.05），2h有所下降，3h再次升高，之后下降至正常水平。其峰值濃度的時間周期狹窄。I7h組變化趨勢和I1h-R6h組類似。
　　結論：①在小型豬心肌缺血模型中，血清中GPBB濃度在缺血1小時后即明顯升高，早于cTnI。②持續(xù)動態(tài)監(jiān)測肌鈣