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文檔簡介
1、目的:
觀察促炎癥消退介質(zhì)D類消退素AT-RvD1對肺癌細胞A549轉(zhuǎn)移能力的影響,同時探索核轉(zhuǎn)錄因子(Nrf2)及M2型丙酮酸激酶(Pkm2)在此過程中的作用,為更深入研究肺癌轉(zhuǎn)移過程和炎癥相關腫瘤的分子機制提供實驗理論依據(jù)。
方法:
1、腫瘤的轉(zhuǎn)移與上皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的關系極其密切,利用不同濃度轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β1構(gòu)建EMT肺癌轉(zhuǎn)移模型,分別利用熒光探針技術(shù)檢測細胞內(nèi)活性氧(ROS)水平,M
2、TT法檢測細胞增殖,劃痕實驗測遷移,Transwell法測侵襲,同時利用實時熒光定量PCR技術(shù)和免疫印跡技術(shù)對上皮細胞表型E-鈣黏蛋白、間質(zhì)細胞表型波形蛋白、Nrf2及Pkm2的表達進行檢測。
2、利用不同濃度AT-RvD1和哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)激活劑預刺激細胞30分鐘,觀察其對TGF-β1誘導的肺癌EMT過程的影響,分別比較細胞增殖性、遷移性,侵襲性的變化,檢測細胞內(nèi)ROS水平及相關基因蛋白的表達情況。
3、 結(jié)果:
1、轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β1能明顯下調(diào)E-鈣黏蛋白和Nrf2的表達,上調(diào)波形蛋白和Pkm2的表達,增加細胞內(nèi)ROS水平并呈濃度依賴,增強A549細胞的遷移及侵襲能力,但對細胞增殖無明顯影響。
2、D類消退素AT-RvD1能抑制TGF-β1誘導的EMT過程,上調(diào)E-鈣黏蛋白和下調(diào)波形蛋白的表達,并且對A549細胞的遷移及侵襲能力有明顯的抑制作用,但不影響細胞的增殖,研究結(jié)果提示,AT-RvD1的抑制作用可能
4、與下調(diào)Nrf2和Pkm2的表達相關。
3、哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)激活劑能逆轉(zhuǎn)AT-RvD1抑制Pkm2的作用,并且下調(diào)E-鈣黏蛋白的表達影響侵襲性,但尚未對細胞的增殖能力有明確影響。
結(jié)論:
1、D類消退素AT-RvD1能抑制TGF-β1誘導的肺癌EMT過程,抑制細胞的遷移及侵襲能力,但對細胞增殖無顯著影響。
2、AT-RvD1可能部分通過抑制mTOR信號進而下調(diào)Pkm2的表達來抑制T
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