消退素D1對脂多糖誘導小鼠急性角膜炎癥反應的調(diào)節(jié)作用及機制.pdf

1、目的：探討脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導小鼠急性角膜炎的臨床表現(xiàn)和炎癥因子的表達水平變化;研究消退素D1(RvD1)在LPS誘導小鼠急性角膜炎癥中發(fā)揮的作用，對細胞因子及趨化因子的影響，探索消退素D1促進炎癥消退的分子機制，初步了解其可能參與的信號通路。
　　方法：本實驗包括兩個部分，第一部分通過建立LPS誘導小鼠急性角膜炎模型，觀察急性期的臨床表現(xiàn)，通過病理學及免疫組織化學的方法研究其炎癥特點，然后使

2、用實時熒光定量PCR方法檢測LPS處理前后角膜組織內(nèi)IL-1β、IL-6、MCP-1及MIP-2四種細胞因子及趨化因子的表達。第二部分使用不同濃度RvD1(50ng/d和500ng/d)對急性期角膜組織進行局部干預，觀察1、3、5天時RvD1對角膜混濁程度及上皮愈合速度的影響;比較角膜組織炎癥反應程度;應用熒光定量PCR及ELISA方法檢測IL-1β、IL-6、MCP-1及MIP-2四種炎癥因子在角膜組織中mRNA及蛋白水平上的表達差異

3、;并通過western blot方法檢測NF-κB信號途徑中內(nèi)源性NF-κB抑制因子IκBα在角膜組織中表達水平的變化，從而探索RvD1可能參與炎癥反應的信號通路。
　　結果：
　　1、LPS刺激后小鼠角膜混濁，HE染色及免疫組化顯示角膜基質(zhì)內(nèi)中性粒細胞浸潤，1～3天達高峰，3～5天逐漸減輕;
　　2、LPS刺激后角膜基質(zhì)細胞合成的細胞因子IL-1β和IL-6，趨化因子MCP-1和MIP-2的mRNA表達水平較正常小鼠

4、明顯增加(P＜0.05);
　　3、通過RvD1-50組（低劑量50ng/d）、RvD1-500(高劑量500ng/d)和對照組(PBS)進行比較，發(fā)現(xiàn)RvD1可明顯減輕角膜炎癥后混濁程度，加快上皮愈合速度;HE染色及免疫組化顯示RvD1可減少中性粒細胞數(shù)量，防止中性粒細胞持續(xù)浸潤;
　　4、熒光實時定量PCR和ELISA檢測發(fā)現(xiàn)RvD1可降低急性期角膜組織IL-1β、IL-6、MCP-1和MIP-2的在mRNA水平和蛋白水

5、平的表達，且和劑量呈正相關;
　　5、western blot顯示在1天和3天時RvD1-500ng/d與對照組相比可增加LPS誘導后NF-κB抑制因子IκBα的表達，而在5d時差異不明顯。
　　結論：LPS刺激后小鼠角膜組織內(nèi)細胞因子IL-1β和IL-6，趨化因子MCP-1和MIP-2的mRNA表達水平較正常小鼠明顯增加，提示IL-1β、IL-6、MCP-1和MIP-2可能參與了角膜炎癥反應。RvD1減輕角膜炎癥后混濁程度