β-人絨毛膜促性腺激素定量檢測(cè)試劑盒的開(kāi)發(fā).pdf

1、人絨毛膜促性腺激素（hCG）由α和β兩個(gè)亞基通過(guò)離子鍵和疏水鍵結(jié)合在一起，分子量大約為39KD，由合體滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌，為人體胎盤(pán)和黃體細(xì)胞中產(chǎn)生的一種糖蛋白激素，對(duì)著床和胚胎營(yíng)養(yǎng)有很大作用[1-4]。同時(shí)對(duì)于婦科炎癥、絨毛膜疾病有一定的輔助診斷價(jià)值[5,6]。本論文主要進(jìn)行β-人絨毛膜促性腺激素（β-HCG）免疫檢測(cè)系統(tǒng)（化學(xué)發(fā)光法）的研發(fā)過(guò)程探討及性能評(píng)估。
　　研究方法：
　　將鄭州伊美諾公司制備的62株β位點(diǎn)抗體進(jìn)行配

2、對(duì)篩選,根據(jù)抗原抗體的最優(yōu)化反應(yīng)原則，確定包被、樣品稀釋液、酶結(jié)合物和反應(yīng)模式。并建立校準(zhǔn)品系統(tǒng)，試劑盒的線性范圍、重復(fù)性、準(zhǔn)確性、最低檢測(cè)限、特異性及穩(wěn)定性指標(biāo)。檢測(cè)1302例健康人血清，以測(cè)定值的99％為界限，通過(guò)SPSS軟件計(jì)算參考區(qū)間。與兩家醫(yī)療機(jī)構(gòu)合作，進(jìn)行不同病理人群考核，驗(yàn)證試劑盒的臨床準(zhǔn)確性。
　　結(jié)果：
　　篩選出最優(yōu)的1對(duì)抗體作為試劑盒開(kāi)發(fā)的原材料，并確定了原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及工藝及反應(yīng)體系。包被：PH6.

3、5,0.2M PB,0.5μg/mL；酶結(jié)合物：PH7.5,0.01M Tris-HCl,50%小牛血清；樣品稀釋液：PH7.5,0.01M TAPS,3%牛血清白蛋白；校準(zhǔn)品：PH7.5,0.01M PBS,3%牛血清白蛋白，校準(zhǔn)品溯源到國(guó)際參考品77364。反應(yīng)體系：兩步法，37℃溫育60+30分鐘，洗滌5次；底物A、B分別加入50μL，5分鐘內(nèi)測(cè)定。試劑盒可以使用的樣本為血清。校準(zhǔn)曲線的建立為發(fā)光值取對(duì)數(shù)后，采用四參數(shù)擬合方式建立

4、校準(zhǔn)曲線。試劑盒的線性范圍為1.0～1000mIU/mL；分析內(nèi)變異、分析間變異和批間變異均不超過(guò)10%；測(cè)定500mIU/mL的LH、500mIU/mL的FSH、500μIU/mL的TSH，檢測(cè)結(jié)果均不超過(guò)1.0mIU/mL；樣本中添加50mg/dL的膽紅素、150mg/dL的血紅蛋白和6000mg/dL的甘油三酯對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響小于10%；最低檢測(cè)限測(cè)定值不超過(guò)1.0 mIU/mL,回收率在0.85-1.15之間?？疾榱苏自噭┖械?/p>

5、加速穩(wěn)定性、拆封穩(wěn)定性和實(shí)時(shí)穩(wěn)定性，結(jié)果均符合要求。參考值設(shè)定為5.0 mIU/mL。臨床研究：在兩家醫(yī)療機(jī)構(gòu)（河南省人民醫(yī)院和河南省中醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院）分別測(cè)定110例和236例臨床樣本，結(jié)果顯示河南省人民醫(yī)院結(jié)果：考核試劑盒與對(duì)比試劑盒的陽(yáng)性符合率為100%，陰性符合率為100%，總符合率為100%。河南省中醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院結(jié)果：考核試劑盒與對(duì)比試劑盒的陽(yáng)性符合率為99.01%，陰性符合率為100%，總符合率為99.03%，兩者