人絨毛膜促性腺激素對乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移作用的研究.pdf

1、目的： 通過構(gòu)建黃體生成素受體(Luteinizing Hormone/human Chorionic Gonadotropin receptor，LHR)真核表達(dá)質(zhì)粒載體(pcDNA3.1(+)-LHR)，轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞，研究人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin，hCG)對乳腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。 方法： 用Kpn I/Hpa I雙酶切LHR-eDNA質(zhì)粒載體；Kp

2、n I/EcoR V雙酶切pcDNA3.1(+)載體，構(gòu)建pcDNA3.1(+)一LHR質(zhì)粒載體，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染MCF-7乳腺癌細(xì)胞，建立穩(wěn)定高表達(dá)LHR的乳腺癌細(xì)胞株。應(yīng)用體外侵襲轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)方法，觀察hCG對乳腺癌細(xì)胞遷移能力的影響。在此基礎(chǔ)上，以半定量RT-PCR，分析hCG對乳腺癌細(xì)胞MMP1、MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP3、VEGF等侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的影響。 結(jié)果： 1、構(gòu)建pcDNA3.1(+)-L

3、HR真核表達(dá)質(zhì)粒載體，通過酶切圖譜及測序等方法鑒定。 2、pcDNA3.1(+)-LHR穩(wěn)定轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞，通過RT-PCR和細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度測定，證實(shí)轉(zhuǎn)染LHR的MCF-7細(xì)胞高表達(dá)LHR。 3、MTT法測定hCG對乳腺癌細(xì)胞增殖力影響，轉(zhuǎn)染LHR的MCF-7細(xì)胞增殖力無明顯改變。 4、應(yīng)用體外侵襲轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)方法，測定hCG對乳腺癌細(xì)胞侵襲力影響，轉(zhuǎn)染LHR的MCF-7細(xì)胞侵襲力明顯降低。 5、應(yīng)用