RGD肽型陽(yáng)離子類(lèi)脂的合成及基因轉(zhuǎn)運(yùn)性能研究.pdf

1、基因治療作為一種新興的癌癥治療方法已用于臨床研究與治療，安全高效的載體是成功的關(guān)鍵。陽(yáng)離子脂質(zhì)體的毒性較低，具有很好的生物相容性，并且易于制備，目前已經(jīng)越來(lái)越受到科研人員的關(guān)注，應(yīng)用前景十分廣闊。
　　本文使用固相合成法合成了精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)三肽，并與中間體A14連接得到了RGD肽型陽(yáng)離子類(lèi)脂，經(jīng)分離提純，得到HPLC純度95％以上的產(chǎn)物。經(jīng)過(guò)ESI-MS、IR和1H NMR等手段的表征，證實(shí)產(chǎn)物結(jié)構(gòu)正確。

2、>　　通過(guò)薄層分散法將所合成的RGD肽型陽(yáng)離子類(lèi)脂制備成陽(yáng)離子脂質(zhì)體，并使用透射電鏡和激光粒度分析儀對(duì)其進(jìn)行分析，證實(shí)所制備的脂質(zhì)體形態(tài)呈現(xiàn)球形，平均尺寸為50nm左右，表面帶正電，電位在80 mV左右。
　　用凝膠電泳延滯實(shí)驗(yàn)考查了RGD型陽(yáng)離子脂質(zhì)體結(jié)合DNA的能力，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，陽(yáng)離子脂質(zhì)體能夠與DNA形成復(fù)合物。當(dāng)脂質(zhì)體與DNA比例增大時(shí)，其與DNA的結(jié)合能力有所增強(qiáng)，助類(lèi)脂(DOPE)的加入可提高脂質(zhì)體結(jié)合DNA的能力。

3、
　　將所制備的RGD肽型陽(yáng)離子脂質(zhì)體運(yùn)載質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染(pGFP-N2a)宮頸癌細(xì)胞(Hela)細(xì)胞。結(jié)果表明，當(dāng)脂質(zhì)體與DNA的質(zhì)量比約為3/1時(shí)，脂質(zhì)體與DOPE的摩爾比為1/1時(shí)，陽(yáng)離子脂質(zhì)體達(dá)到了最高轉(zhuǎn)染效率，其轉(zhuǎn)染效果與商品化的轉(zhuǎn)染試劑DOTAP和Lipofectamine2000相當(dāng)。
　　使用MTT比色法評(píng)價(jià)了RGD肽型陽(yáng)離子脂質(zhì)體的細(xì)胞毒性。結(jié)果表明，以RGD肽為頭部的陽(yáng)離子脂質(zhì)體作為運(yùn)載基因的載體對(duì)Hel