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文檔簡介
1、目的:動脈粥樣硬化性心血管疾病是一種由多種危險(xiǎn)因素互相影響的復(fù)雜疾病。高膽固醇飼料(HCD)能夠誘導(dǎo)家兔動脈粥樣硬化和高脂血癥,分析家兔血漿一氧化氮(NO)水平與動脈粥樣硬化損傷之間的關(guān)系。并通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn),闡明NO在動脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展過程中的分子機(jī)制,并闡明普羅布考(PB)在這一過程中的藥理作用。
方法:(1)20只雄性日本大耳白家兔隨機(jī)分為對照組和實(shí)驗(yàn)組,對照組飼喂正常飼料,實(shí)驗(yàn)組飼喂HCD,16周后,檢測血脂水平,
2、分離主動脈樹,蘇丹Ⅳ染色,分析動脈粥樣硬化斑塊面積。蘇木精伊紅染色、范吉爾森彈性纖維染色以及免疫組織化學(xué)染色方法分析主動脈弓部斑塊的組織學(xué)特征,檢測血漿NO水平,并將其與動脈粥樣硬化斑塊面積大小以及斑塊中巨噬細(xì)胞的表達(dá)量進(jìn)行相關(guān)性分析。
(2)體外實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)巨噬細(xì)胞RAW264.7,用ox-LDL進(jìn)行刺激,PB進(jìn)行干預(yù),分別檢測細(xì)胞上清NO水平,RT-PCR法測定巨噬細(xì)胞中誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA水平的表達(dá),Wes
3、tern Blotting法測定iNOS蛋白的表達(dá)。
結(jié)果:(1)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分,與對照組相比,實(shí)驗(yàn)組家兔血漿總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇及NO水平均顯著升高;實(shí)驗(yàn)組家兔主動脈血管內(nèi)壁出現(xiàn)大量動脈粥樣硬化斑塊;動脈粥樣硬化斑塊面積大小及斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞表達(dá)量與血漿NO水平呈正相關(guān)。
(2)體外實(shí)驗(yàn)部分,與對照組相比,隨著ox-LDL刺激濃度的上升,細(xì)胞上清中的NO水平呈劑量依賴性,iNOS mRNA的表達(dá)水平也
4、逐漸增加,iNOS蛋白的表達(dá)水平也有所增加,而當(dāng)加入PB后,這些現(xiàn)象均會出現(xiàn)不同程度的逆轉(zhuǎn)。
結(jié)論:(1)在HCD誘導(dǎo)的家兔動脈粥樣硬化斑塊中,斑塊面積大小及斑塊中巨噬細(xì)胞表達(dá)量均與血漿NO有相關(guān)性。這提示血漿NO水平可能與動脈粥樣硬化初期發(fā)生和發(fā)展相關(guān)。
(2)NO水平的上升與動脈粥樣硬化斑塊中巨噬細(xì)胞的表達(dá)有關(guān),其作用機(jī)制可能與巨噬細(xì)胞中的iNOS基因被激活有關(guān)。
(3)PB作為治療動脈粥硬化的藥物,其
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