普羅布考對動脈粥樣硬化兔HDL功能的影響及其調(diào)控機制探討.pdf

1、一.研究背景
　　 動脈粥樣硬化(AS)是心腦血管系統(tǒng)中最常見的疾病,嚴重危害人類健康。一直以來,流行病學調(diào)查結果表明,高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)的水平與冠心病的發(fā)生率呈負相關,但現(xiàn)在許多研究發(fā)現(xiàn)一個矛盾現(xiàn)象,即升高HDL-C,無臨床獲益,降低HDL-C,動脈粥樣斑塊反而消退。這也引起人們對HDL“質(zhì)”(功能)和“量”(濃度),誰更重要的思考。HDL是一組不均一的脂蛋白,具有異質(zhì)性。HDL對心血管的保護作用與HDL亞類在血

2、中的相對含量、顆粒大小有關。HDL的一個主要的心血管保護功能是在逆膽固醇轉(zhuǎn)運(RCT)中的作用,即促進膽固醇外流和逆向轉(zhuǎn)運的功能,防止外周組織過多脂質(zhì)的蓄積。RCT是指將外周組織(包括動脈壁)游離膽固醇經(jīng)由細胞膜上三磷酸腺苷結合盒轉(zhuǎn)運體A1(ABCA1)和清道夫受體-BI(SR-BI)外流,與血漿中載脂蛋白A-I(apo-AI)結合后逐漸形成成熟HDL,通過HDL轉(zhuǎn)運至肝臟代謝,從而達到減輕或逆轉(zhuǎn)AS的作用。逆膽固醇轉(zhuǎn)運是機體排出過多膽

3、固醇的唯一途徑,也是目前研究認為機體抗動脈粥樣硬化最重要的機制之一。
　　 ABCA1、SR-BI在介導細胞內(nèi)膽固醇流出中發(fā)揮重要作用。SR-BI是CD36蛋白家族成員,其是HDL受體,介導HDL的選擇性攝取,既介導細胞內(nèi)游離膽固醇(FC)流出也介導細胞外FC流入；ABCA1是三磷酸腺苷結合盒轉(zhuǎn)運體A1超家族成員(ABC)之一,它們以ATP為能源轉(zhuǎn)運各種底物,促進細胞內(nèi)FC和磷脂流出,也促進apoA-I的酯化和新生HDL的生成。

4、
　　 普羅布考是一類作用特殊的降脂藥物,在降低總膽固醇的同時也明顯降低HDL-C,但是其仍可以抑制甚至消退動脈粥樣硬化斑塊,有研究推測其重要機制是促進體內(nèi)RCT,但具體作用機制不明。以往有研究報道,普羅布考主要通過調(diào)節(jié)SR-BI而促進膽固醇的代謝從而起到抗AS的作用,但也有研究認為普羅布考抗AS作用與SR-BI無明顯關系；另外,ABCA1在普羅布考抗AS機制中所扮演的角色目前也存在爭議。有研究發(fā)現(xiàn)普羅布考可引起HDL亞類的變化

5、,但其發(fā)生機制如何及在普羅布考抗AS功能中起到何作用仍未清楚。
　　 二.研究目的：
　　 我們以動脈粥樣硬化兔模型為研究對象,觀察肝細胞、腹腔巨噬細胞ABCA1、SR-BI表達及其[3H]膽固醇轉(zhuǎn)出率和HDL亞類在AS形成的作用,同時分析在AS狀態(tài)下普羅布考對上述指標的影響,從而探討RCI過程中普羅布考抗動脈粥樣硬化新機制。
　　 三.方法
　　 18只新西蘭大白兔隨機分為:①正常對照組(n=6):給予

6、普通飲食喂養(yǎng)；②動脈粥樣硬化(AS)組(n=6):飼以高脂飼料；③普羅布考組(n=6):在飼以高脂飲食基礎上給予普羅布考[400 mg/(kg·d)]。12周后取血以酶法測定血脂;利用流式細胞儀檢測腹腔巨噬細胞、肝細胞表面ABCA1、SR-BI蛋白表達量；液閃計數(shù)儀檢測腹腔巨噬細胞、肝細胞[3H]膽固醇轉(zhuǎn)出率；沉淀法測定血漿HDL2及HDL3濃度；將主動脈常規(guī)HE染色進行組織病理學觀察,測量其主動脈內(nèi)中膜厚度(IMT)。
　　

7、四.結果
　　 1、入組時(O周)各組動物間血漿TC(F=0.921,P>0.05)、LDL-C(F=0.003P>0.05)、HDL-C(F=0.338,P>0.05)、TG(F=0.453,P>0.05)、NHDL-C(F=0.774,P>0.05)水平均無明顯差異。實驗12周以后,AS組血清TC(23.25±3.30vsl.79±0.21,P<0.001)、LDL-C(18.09±4.04 vs 1.09±0.23,P<0

8、.001)、HDL-C(1.11±O.09 vs 0.45±0.12,P<0.001)、TG(1.58±0.25 vs 1.024±0.15,P<0.001)、NHDL-C(22.15±3.22 vs 1.34±0.10,P

9、0.51±0.06 vs 1.11±0.09,P<0.001)、NHDL-C(16.19±0.64 vs 22.15±3.22,P<0.001)較AS組明顯降低,對TG(1.60±0.17 vs1.58±0.25,P>0.05)無明顯影響。
　　 2、AS組腹腔巨噬細胞(5.79±0.97 vs 11.45±2.15,P<0.001)、肝細胞(10.16±2.01 vs 19.48±2.19,P<0.001)[3H]膽固醇轉(zhuǎn)出率

10、較正常對照組明顯下降；普羅布考組腹腔巨噬細胞(11.20±1.45 vs 5.79±0.97,P<0.001)、肝細胞(20.41±2.49 vs 10.16±2.01,P<0.001)[3H]膽固醇轉(zhuǎn)出率較AS組明顯增加；。
　　 3、12周后各組兔肝細胞及巨噬細胞ABCA1蛋白表達情況:AS組肝細胞(3.25±0.97 vs 5.29±1.71,P<0.05)及巨噬細胞(16.49±4.10 vs 24.93±3.85,P<

11、0.05)ABCA1蛋白表達較正常對照組下調(diào)；普羅布考組肝細胞(4.95±1.24 vs 3.25±0.97,P<0.05)及巨噬細胞(23.73±3.81 vs 16.49±4.10,P<0.05)ABCA1蛋白表達較AS組上升。12周后各組兔肝細胞及巨噬細胞SR-BI蛋白表達情況:AS組肝細胞(26.12±5.12 vs 36.13±6.97,P<0.05)及巨噬細胞(10.23±2.04 vs 15.14±1.46,P<0.05)

12、SR-BI蛋白表達較正常對照組下調(diào),普羅布考組肝細胞(47.06±10.64 vs26.12±5.21,P<0.001)及巨噬細胞(20.27±2.20 vs 15.14±1.46,P<0.001)SR-BI蛋白表達較AS組上升。
　　 4、實驗12周,與正常對照組相比,AS組HDL2/HDL比例降低(0.33±0.03vs 0.40±0.03,P<0.05)；與AS組相比,普羅布考組HDL2/HDL比例明顯降低(0.24±0.

13、02 vs 0.33±0.03,P<0.05)。
　　 5、實驗12周,與正常對照組組相比,AS組主動脈IMT明顯增厚(527.41±85.16 vs 203.20±30.61,P<0.001)；與AS組相比,普羅布考組主動脈IMT明顯減小(239.83±50.51 vs 527.41±85.16,P<0.001)。
　　 五.結論
　　 1、普羅布考降低AS兔血漿TC、LDL-C、HDL-C水平。