普羅布考對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化兔HDL功能的影響及其調(diào)控機(jī)制探討.pdf

1、一.研究背景
　　 動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是心腦血管系統(tǒng)中最常見的疾病,嚴(yán)重危害人類健康。一直以來,流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明,高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)的水平與冠心病的發(fā)生率呈負(fù)相關(guān),但現(xiàn)在許多研究發(fā)現(xiàn)一個(gè)矛盾現(xiàn)象,即升高HDL-C,無臨床獲益,降低HDL-C,動(dòng)脈粥樣斑塊反而消退。這也引起人們對(duì)HDL“質(zhì)”(功能)和“量”(濃度),誰更重要的思考。HDL是一組不均一的脂蛋白,具有異質(zhì)性。HDL對(duì)心血管的保護(hù)作用與HDL亞類在血

2、中的相對(duì)含量、顆粒大小有關(guān)。HDL的一個(gè)主要的心血管保護(hù)功能是在逆膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)(RCT)中的作用,即促進(jìn)膽固醇外流和逆向轉(zhuǎn)運(yùn)的功能,防止外周組織過多脂質(zhì)的蓄積。RCT是指將外周組織(包括動(dòng)脈壁)游離膽固醇經(jīng)由細(xì)胞膜上三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ABCA1)和清道夫受體-BI(SR-BI)外流,與血漿中載脂蛋白A-I(apo-AI)結(jié)合后逐漸形成成熟HDL,通過HDL轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟代謝,從而達(dá)到減輕或逆轉(zhuǎn)AS的作用。逆膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)是機(jī)體排出過多膽

3、固醇的唯一途徑,也是目前研究認(rèn)為機(jī)體抗動(dòng)脈粥樣硬化最重要的機(jī)制之一。
　　 ABCA1、SR-BI在介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出中發(fā)揮重要作用。SR-BI是CD36蛋白家族成員,其是HDL受體,介導(dǎo)HDL的選擇性攝取,既介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)游離膽固醇(FC)流出也介導(dǎo)細(xì)胞外FC流入；ABCA1是三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1超家族成員(ABC)之一,它們以ATP為能源轉(zhuǎn)運(yùn)各種底物,促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)FC和磷脂流出,也促進(jìn)apoA-I的酯化和新生HDL的生成。

4、
　　 普羅布考是一類作用特殊的降脂藥物,在降低總膽固醇的同時(shí)也明顯降低HDL-C,但是其仍可以抑制甚至消退動(dòng)脈粥樣硬化斑塊,有研究推測其重要機(jī)制是促進(jìn)體內(nèi)RCT,但具體作用機(jī)制不明。以往有研究報(bào)道,普羅布考主要通過調(diào)節(jié)SR-BI而促進(jìn)膽固醇的代謝從而起到抗AS的作用,但也有研究認(rèn)為普羅布考抗AS作用與SR-BI無明顯關(guān)系；另外,ABCA1在普羅布考抗AS機(jī)制中所扮演的角色目前也存在爭議。有研究發(fā)現(xiàn)普羅布考可引起HDL亞類的變化

5、,但其發(fā)生機(jī)制如何及在普羅布考抗AS功能中起到何作用仍未清楚。
　　 二.研究目的：
　　 我們以動(dòng)脈粥樣硬化兔模型為研究對(duì)象,觀察肝細(xì)胞、腹腔巨噬細(xì)胞ABCA1、SR-BI表達(dá)及其[3H]膽固醇轉(zhuǎn)出率和HDL亞類在AS形成的作用,同時(shí)分析在AS狀態(tài)下普羅布考對(duì)上述指標(biāo)的影響,從而探討RCI過程中普羅布考抗動(dòng)脈粥樣硬化新機(jī)制。
　　 三.方法
　　 18只新西蘭大白兔隨機(jī)分為:①正常對(duì)照組(n=6):給予

6、普通飲食喂養(yǎng)；②動(dòng)脈粥樣硬化(AS)組(n=6):飼以高脂飼料；③普羅布考組(n=6):在飼以高脂飲食基礎(chǔ)上給予普羅布考[400 mg/(kg·d)]。12周后取血以酶法測定血脂;利用流式細(xì)胞儀檢測腹腔巨噬細(xì)胞、肝細(xì)胞表面ABCA1、SR-BI蛋白表達(dá)量；液閃計(jì)數(shù)儀檢測腹腔巨噬細(xì)胞、肝細(xì)胞[3H]膽固醇轉(zhuǎn)出率；沉淀法測定血漿HDL2及HDL3濃度；將主動(dòng)脈常規(guī)HE染色進(jìn)行組織病理學(xué)觀察,測量其主動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度(IMT)。
　　

7、四.結(jié)果
　　 1、入組時(shí)(O周)各組動(dòng)物間血漿TC(F=0.921,P>0.05)、LDL-C(F=0.003P>0.05)、HDL-C(F=0.338,P>0.05)、TG(F=0.453,P>0.05)、NHDL-C(F=0.774,P>0.05)水平均無明顯差異。實(shí)驗(yàn)12周以后,AS組血清TC(23.25±3.30vsl.79±0.21,P<0.001)、LDL-C(18.09±4.04 vs 1.09±0.23,P<0

8、.001)、HDL-C(1.11±O.09 vs 0.45±0.12,P<0.001)、TG(1.58±0.25 vs 1.024±0.15,P<0.001)、NHDL-C(22.15±3.22 vs 1.34±0.10,P

9、0.51±0.06 vs 1.11±0.09,P<0.001)、NHDL-C(16.19±0.64 vs 22.15±3.22,P<0.001)較AS組明顯降低,對(duì)TG(1.60±0.17 vs1.58±0.25,P>0.05)無明顯影響。
　　 2、AS組腹腔巨噬細(xì)胞(5.79±0.97 vs 11.45±2.15,P<0.001)、肝細(xì)胞(10.16±2.01 vs 19.48±2.19,P<0.001)[3H]膽固醇轉(zhuǎn)出率

10、較正常對(duì)照組明顯下降；普羅布考組腹腔巨噬細(xì)胞(11.20±1.45 vs 5.79±0.97,P<0.001)、肝細(xì)胞(20.41±2.49 vs 10.16±2.01,P<0.001)[3H]膽固醇轉(zhuǎn)出率較AS組明顯增加；。
　　 3、12周后各組兔肝細(xì)胞及巨噬細(xì)胞ABCA1蛋白表達(dá)情況:AS組肝細(xì)胞(3.25±0.97 vs 5.29±1.71,P<0.05)及巨噬細(xì)胞(16.49±4.10 vs 24.93±3.85,P<

11、0.05)ABCA1蛋白表達(dá)較正常對(duì)照組下調(diào)；普羅布考組肝細(xì)胞(4.95±1.24 vs 3.25±0.97,P<0.05)及巨噬細(xì)胞(23.73±3.81 vs 16.49±4.10,P<0.05)ABCA1蛋白表達(dá)較AS組上升。12周后各組兔肝細(xì)胞及巨噬細(xì)胞SR-BI蛋白表達(dá)情況:AS組肝細(xì)胞(26.12±5.12 vs 36.13±6.97,P<0.05)及巨噬細(xì)胞(10.23±2.04 vs 15.14±1.46,P<0.05)

12、SR-BI蛋白表達(dá)較正常對(duì)照組下調(diào),普羅布考組肝細(xì)胞(47.06±10.64 vs26.12±5.21,P<0.001)及巨噬細(xì)胞(20.27±2.20 vs 15.14±1.46,P<0.001)SR-BI蛋白表達(dá)較AS組上升。
　　 4、實(shí)驗(yàn)12周,與正常對(duì)照組相比,AS組HDL2/HDL比例降低(0.33±0.03vs 0.40±0.03,P<0.05)；與AS組相比,普羅布考組HDL2/HDL比例明顯降低(0.24±0.

13、02 vs 0.33±0.03,P<0.05)。
　　 5、實(shí)驗(yàn)12周,與正常對(duì)照組組相比,AS組主動(dòng)脈IMT明顯增厚(527.41±85.16 vs 203.20±30.61,P<0.001)；與AS組相比,普羅布考組主動(dòng)脈IMT明顯減小(239.83±50.51 vs 527.41±85.16,P<0.001)。
　　 五.結(jié)論
　　 1、普羅布考降低AS兔血漿TC、LDL-C、HDL-C水平。