蘇云金芽孢桿菌噬菌體MZTP02 orf3和orf4的研究.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文蘇云金芽孢桿菌噬菌體MZTP02f3和f4的研究姓名：賈艷華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：龐義20081201中玉大學(xué)博士擘位論文GMAGKTIGSLRRNV，其中前者可能性比較大，此項(xiàng)預(yù)測(cè)與前面的WalkerA模序預(yù)測(cè)有很好的一致性，進(jìn)一步說舞了40，55位的氨基酸序列為ATP結(jié)合位點(diǎn)的可能性?？寺×薿D和off4兩個(gè)基因，基因序列與GenBank中的序列一致。并將003克隆到表達(dá)載體pQE30上，of

2、f4克隆到pET32a()上，實(shí)現(xiàn)了兩個(gè)基因的原核表達(dá)，兩個(gè)蛋白均為融合鬣白，Off3目的蛋白在N端融合有6xHis標(biāo)簽，Orf4遐的蛋白在C端同樣融合有6xHis標(biāo)簽。對(duì)目的蛋白進(jìn)行了可溶性矜析，可以形成可溶性移包涵體兩種形式的蛋自。融合蛋自經(jīng)6xHis蛋自純化試劑盒非變性純化后，用超濾管進(jìn)行脫鹽濃縮，及腸激酶酶切釋放目標(biāo)蛋白。對(duì)兩個(gè)蛋白產(chǎn)物進(jìn)行活性測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：Orl3具有DNA結(jié)合活性，or掰具有ATPase活性。對(duì)off3

3、和00“4兩個(gè)基因進(jìn)行RTPCR分析，結(jié)果顯示兩個(gè)基因在正常培養(yǎng)條件下的溶源菌株中均有轉(zhuǎn)錄，并且在同一個(gè)轉(zhuǎn)錄本上。Northernblot和步移RTPCR法確定了轉(zhuǎn)錄本的大小，存在兩個(gè)轉(zhuǎn)錄本，分別為7Okb和53kb。為了檢測(cè)正常培養(yǎng)條件下溶源菌株中兩個(gè)基因的表達(dá)狀況，將在Ecofi中表達(dá)的兩個(gè)蛋自加以純化，免疫新西蘭大白兔，制各了Oft3和Orf4的蛋自抗體，Westernblot結(jié)果顯示這兩個(gè)基因在宿主菌中均有表達(dá)。構(gòu)建了off3和