成人T細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病預(yù)后分子標(biāo)記PHF6和DNM2特征研究.pdf

1、本文通過以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 PHF6在成人T細(xì)胞性急性淋巴細(xì)胞白血病中的特征研究
　　目的:T細(xì)胞祖細(xì)胞在轉(zhuǎn)化過程中出現(xiàn)多種基因的異常改變，這些異?；騾f(xié)同作用即導(dǎo)致T細(xì)胞性急性淋巴細(xì)胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia，T-ALL)的產(chǎn)生。PHF6(plant homeodomain finger6)是近期研究發(fā)現(xiàn)的關(guān)鍵性腫瘤抑制基因，且在T-ALL疾病中存在突

2、變。本研究目的在于研究成人T-ALL中PHF6基因突變、表達(dá)及臨床意義。
　　方法:本研究通過對成人T-ALL患者的PHF6基因外顯子(exon)2-10進(jìn)行擴(kuò)增、克隆和測序，研究PHF6突變的發(fā)生率、突變位點和類型。通過實時熒光定量PCR檢測T-ALL患者PHF6 mRNA的表達(dá)水平。分析PHF6突變及表達(dá)異常與NOTCH1突變的相關(guān)性及預(yù)后意義。統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS20.0軟件，白細(xì)胞(white blood cell，WB

3、C)、血紅蛋白(hemoglobin，Hb)、血小板(platelet，PLT)、乳酸脫氫酶(1actic dehydrogenase，LDH)等計量資料的差異采用非參數(shù)Mann-Whitney檢驗;計數(shù)資料采用X2檢驗（或Fisher精確檢驗）;Kaplan-Meier檢驗方法建立生存曲線，并對不同分組進(jìn)行總生存(overall survival，OS)時間和無事件生存(event-free survival，EFS)時間的生存分析。

4、P＜0.05認(rèn)為結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:本研究成人T-ALL患者中，PHF6基因突變率為27.1％(16/59)，其中包括10例新發(fā)現(xiàn)的突變，其中6例為框移突變(6/16，37.5％)，可導(dǎo)致PHF6功能的喪失。此外，本研究發(fā)現(xiàn)在T-ALL患者中PHF6 mRNA表達(dá)水平顯著降低。重要的是，本研究發(fā)現(xiàn)PHF6突變與高齡、血紅蛋白濃度降低、CD13陽性表達(dá)、脾腫大或淋巴結(jié)腫大具有顯著相關(guān)性。另外，PHF6突變與NOTCH1突

5、變具有顯著相關(guān)性，同時具有這兩種突變的T-ALL患者的EFS時間顯著減少。結(jié)論:在T-ALL中PHF6基因由于低表達(dá)或突變導(dǎo)致失活。PHF6突變可以與NOTCH1突變共存，且具有這兩種突變的患者有著更差的預(yù)后。在T-ALL患者中，PHF6突變與NOTCH1突變的協(xié)同致癌因素可能是一種潛在的預(yù)后標(biāo)志。
　　第二部分 DNM2在成人T細(xì)胞性急性淋巴細(xì)胞白血病中的突變研究
　　目的:DNM2(dynamin2)基因是一種轉(zhuǎn)錄因子，

6、參與多種細(xì)胞功能，如胞吞，吞噬體形成，細(xì)胞內(nèi)運輸，與肌動蛋白和微管網(wǎng)相互作用，以及促進(jìn)細(xì)胞凋亡等。本研究目的在于研究成人T細(xì)胞性急性淋巴細(xì)胞白血病(T-cell acutelymphoblastic leukemia，T-ALL)中DNM2基因突變。
　　方法:本研究通過對成人T-ALL患者的DNM2基因外顯子(exon)2-10、12-14和16-22進(jìn)行擴(kuò)增和測序，研究DNM2突變的發(fā)生率、突變位點和類型，分析DNM2突變與N

7、OTCH1和PHF6突變的相關(guān)性。統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS20.0軟件，白細(xì)胞(white blood cell，WBC)、血紅蛋白(hemoglobin，Hb)、血小板(platelet，PLT)等計量資料的差異采用非參數(shù)Mann-Whitney檢驗;計數(shù)資料采用X2檢驗（或Fisher精確檢驗）。P＜0.05認(rèn)為結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:本研究成人T-ALL患者中，DNM2基因突變率為9.52％(4/42)，4例突變均為點

8、突變(R361X，Y485H，G537S和R601W)，其中2例位于MID域，2例位于PH域。4例DNM2突變患者均存在NOTCH1突變，這4例NOTCH1突變發(fā)生于HD-N、HD-C及PEST域;其中3例合并存在PHF6突變，3例PHF6突變發(fā)生于exon4、5、8。另外，本研究發(fā)現(xiàn)DNM2有同義氨基酸突變，發(fā)生于exon4(1/42,2.38％)、exon6(1/42,2.38％)、exon22(1/42,2.38％)，特別在exo

9、n20有著高發(fā)生率(35/42，83.33％)，且exon20存在2種同義氨基酸突變(Ala713A1a和Asp720Asp)，其中A713A的突變率為73.81％(31/42)，并且此突變也發(fā)生于B細(xì)胞性急性淋巴細(xì)胞白血病(B-cell acute lymphoblastic leukemia，B-ALL)及健康人中，突變率均在80％以上。
　　結(jié)論:DNM2突變與NOTCH1突變及PHF6突變有著共存現(xiàn)象，可能在T-ALL的發(fā)