SIRPα及LincRNA-Cox2在結(jié)核菌感染中的作用研究.pdf

1、結(jié)核病是嚴(yán)重威脅人類健康的全球性問題。近年來隨著臨床結(jié)核病耐藥的不斷增加以及艾滋病的廣泛流行，結(jié)核病的發(fā)病率和死亡率又有上升的趨勢。結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis，Mtb)是結(jié)核病的病原菌，其侵入人體后主要被單核巨噬細(xì)胞吞噬。Mtb很難被徹底清除，極易在細(xì)胞內(nèi)持續(xù)潛伏，一旦被激活，即形成復(fù)發(fā)感染。結(jié)核病的許多癥狀并非Mtb的直接毒力所致，而是宿主免疫反應(yīng)的表現(xiàn)。因此，WHO提倡采用化學(xué)藥物療法與免疫療

2、法相結(jié)合的治療方案，促使我們進一步研究結(jié)核病的發(fā)病機制和保護性免疫機制。
　　基因芯片技術(shù)是近幾年發(fā)展起來的新興技術(shù)，應(yīng)用該技術(shù)進行高通量篩選及檢測分析，在尋找和篩查新基因、進行基因突變體和基因多態(tài)性檢測以及靶基因的預(yù)測等方面有著廣泛的應(yīng)用前景。本研究應(yīng)用全基因組測序技術(shù)，對結(jié)核菌感染模型的轉(zhuǎn)錄RNA（mRNA）、微小RNA(microRNA)和長鏈非編碼RNA（lincRNA）進行了篩選及鑒定，發(fā)現(xiàn)了結(jié)核菌感染中的關(guān)鍵蛋白．信號

3、調(diào)節(jié)蛋白α（SIRPα）和關(guān)鍵基因lincRNA-Cox2。
　　信號調(diào)節(jié)蛋白α(signal regulatory proteinα，SIRPα)是一種主要發(fā)揮抑制性作用的免疫球蛋白受體。已有研究發(fā)現(xiàn)，脂多糖(LPS)引起的天然免疫應(yīng)答中SIRPα是一個重要的免疫反應(yīng)抑制子。LPS誘導(dǎo)的SIRPα表達下調(diào)能激活Toll樣受體(TLR)信號通路中天然免疫應(yīng)答，對抵抗病原生物的入侵起到重要作用。但目前，SIRPα在Mtb感染中的作用

4、尚不清楚。因此本研究在Mtb感染的小鼠巨噬細(xì)胞及結(jié)核病患者肺組織中驗證了Mtb感染下調(diào)SIRPα的現(xiàn)象。應(yīng)用穩(wěn)定低表達SIRPα的小鼠巨噬細(xì)胞（SIRPα-KD），研究了SIRPα對巨噬細(xì)胞中結(jié)核菌生存率的影響，初步探討了下調(diào)SIRPα與自噬激活之間的內(nèi)在聯(lián)系，并利用信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中關(guān)鍵酶的磷酸化水平來研究下調(diào)SIRPα激活的TLR信號通路，初步研究了SIRPα在Mtb感染巨噬細(xì)胞后發(fā)揮負(fù)性調(diào)控作用的分子機制。
　　lincRNA-

5、Cox2是一條位于COX-2上游51kd的基因，在細(xì)胞初級免疫應(yīng)答中起重要的作用。對感染與非感染Mtb的巨噬細(xì)胞模型進行全基因組測序，經(jīng)PCR驗證發(fā)現(xiàn)，lincRNA-cox2的表達差異較為顯著，感染組較非感染組上調(diào)幅度為10倍以上。利用信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑來研究lincRNA-Cox2殺菌的信號通路，發(fā)現(xiàn)TLR中p38MAPK、JNK通路是Mtb感染后上調(diào)lincRNA-Cox2的關(guān)鍵通路。本研究應(yīng)用siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)，建立瞬轉(zhuǎn)低表達l

6、incRNA-Cox2的巨噬細(xì)胞系，研究了lincRNA-Cox2對Mtb感染后炎癥因子TNF-c的影響，初步揭示了lincRNA-Cox2在Mtb感染巨噬細(xì)胞后發(fā)揮殺菌作用的分子機制。
　　本論文主要研究結(jié)果如下:
　　1、建立了BCG感染小鼠巨噬細(xì)胞模型，從炎癥因子、炎癥反應(yīng)關(guān)鍵酶兩個方面，驗證感染模型建立成功與否，為后續(xù)研究提供基礎(chǔ)。
　　2、經(jīng)基因芯片篩選出差異表達基因，并從中選取SIRPα和LincRNA-C

7、ox2做進一步深入研究。經(jīng)過對細(xì)胞感染模型和結(jié)核病患者肺組織檢測，進一步驗證了基因芯片結(jié)果:感染Mtb會下調(diào)SIRPα的表達。
　　3、SIRPα在Mtb感染中發(fā)揮負(fù)性調(diào)控作用。下調(diào)SIRPα后會抑制Mtb在巨噬細(xì)胞內(nèi)的生存，這種抑菌作用有可能通過激活自噬而實現(xiàn)。
　　4、下調(diào)SIRPα后會激活p38MAPK通路，并且引起下游TNF-α和炎癥反應(yīng)關(guān)鍵酶Cox-2的表達升高，又進一步促進了對Mtb的殺滅。
　　5、Lin

8、cRNA-Cox2的殺菌作用可能是通過激活p38MAPK、JNK通路，進而促進轉(zhuǎn)錄因子TNF-α的釋放，起到控制Mtb感染的作用。
　　綜上所述，SIRPα在Mtb感染巨噬細(xì)胞的過程中發(fā)揮負(fù)性調(diào)節(jié)作用。根據(jù)已有結(jié)果推測，下調(diào)SIRPα可能通過激活p38MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路誘導(dǎo)自噬的發(fā)生，參與結(jié)核菌感染中的炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)過程，為進一步闡明結(jié)核菌感染的免疫調(diào)控機制以及研發(fā)抗結(jié)核藥物提供了新的靶標(biāo)。Mtb感染可能通過激活TLR中p38M