酸棗仁湯對(duì)基于5-HTR調(diào)控老年失眠SCN及VLPO系統(tǒng)的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：整理睡眠剝奪與酸棗仁湯的相關(guān)文獻(xiàn)，結(jié)合本課題組前期研究基礎(chǔ)，通過(guò)建立老年大鼠慢性睡眠剝奪模型，探討酸棗仁湯對(duì)老年失眠大鼠下丘腦視交叉上核系統(tǒng)和下丘腦腹外側(cè)視前區(qū)系統(tǒng)及兩者投射關(guān)系的作用及作用機(jī)制。
　　方法：
　　理論探討：查閱睡眠剝奪與酸棗仁湯的相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)經(jīng)典的理論內(nèi)容以及前沿的科學(xué)研究進(jìn)行總結(jié)，明確睡眠覺醒調(diào)節(jié)機(jī)制以及酸棗仁湯的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，探討酸棗仁湯對(duì)睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的睡眠調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)探討：選取

2、SPF級(jí)SD老年大鼠，用自制睡眠剝奪箱剝奪快動(dòng)眼睡眠21d，連續(xù)給藥14d，其檢測(cè)指標(biāo)如下：
　　1.酸棗仁湯對(duì)老年慢性睡眠剝奪大鼠心肌細(xì)胞凋亡及 bcl-2、bax蛋白表達(dá)的影響
　　Tunel染色法觀察慢性睡眠剝奪后大鼠心肌細(xì)胞凋亡情況，免疫組織化學(xué)染色法觀察慢性睡眠剝奪后大鼠心肌細(xì)胞bcl-2、bax表達(dá)的變化。
　　2.酸棗仁湯對(duì)老年慢性睡眠剝奪大鼠SCN系統(tǒng)的影響
　　透射電鏡觀察大腦下丘腦視交叉上核部

3、位形態(tài)學(xué)改變。采用免疫組織化學(xué)染色法觀察c-fos蛋白表達(dá)的變化。
　　免疫組織化學(xué)染色法以及Realtime-PCR法觀察SCN中vSPZ和DMH區(qū)內(nèi)第二信使NO合成酶（nNOS）以及VIP、AVP神經(jīng)元表達(dá)的變化。
　　3.酸棗仁湯對(duì)老年慢性睡眠剝奪大鼠VLPO系統(tǒng)的影響
　　免疫組化染色法和免疫熒光染色法觀察甘丙肽表達(dá)的變化。
　　尼氏染色法檢測(cè)VLPO神經(jīng)元表達(dá)的變化。
　　免疫組化染色法和免疫熒光

4、染色法觀察 GABA表達(dá)的變化， Realtime-PCR法檢測(cè)下丘腦γ-氨基丁酸A受體（GABAAR）α1和γ2亞單位的表達(dá)。
　　采用熒光分光光度法檢測(cè)5-HT含量，Realtime-PCR法檢測(cè)下丘腦5-HT1AR、5-HT2ARmRNA表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：
　　1.酸棗仁湯對(duì)老年慢性睡眠剝奪大鼠心肌細(xì)胞凋亡及bcl-2、bax蛋白表達(dá)的影響
　　Tunel染色法觀察心肌凋亡細(xì)胞凋亡情況實(shí)驗(yàn)結(jié)果與環(huán)境對(duì)

5、照組比較，慢性睡眠剝奪模型組凋亡細(xì)胞數(shù)明顯增加（P<0.05）；與慢性睡眠剝奪模型組比較，舒樂安定組和酸棗仁湯組凋亡細(xì)胞數(shù)有不同程度的減少（P<0.05）。
　　免疫組織化學(xué)染色法觀察 bcl-2、bax表達(dá)的結(jié)果與環(huán)境對(duì)照組比較，慢性睡眠剝奪模型組bcl-2、bax活性均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)（P<0.05）；與慢性睡眠剝奪模型組比較，舒樂安定組和酸棗仁湯組相bcl-2、bax明顯降低（P<0.05）。
　　2.酸棗仁湯對(duì)老年慢性睡

6、眠剝奪大鼠SCN系統(tǒng)的影響
　　SCN形態(tài)超微病理學(xué)觀察結(jié)果與環(huán)境對(duì)照組比較，慢性睡眠剝奪模型組 SCN神經(jīng)元中脂褐素（Lipo）增多增大，擴(kuò)張腫脹的 Golgi囊泡明顯增多。與慢性睡眠剝奪組比較，舒樂安定組和酸棗仁湯組則LIPO相對(duì)減少并且變小。其中酸棗仁湯組變化最為顯著。
　　與環(huán)境對(duì)照組比較，慢性睡眠剝奪模型組nNos、c-fos mRNA表達(dá)上調(diào)；與慢性睡眠剝奪模型組比較，舒樂安定組和酸棗仁湯組 c-fos、nNos

7、 mRNA表達(dá)下調(diào)。
　　與環(huán)境對(duì)照組比較，慢性睡眠剝奪模型組 VIP、AVP mRNA表達(dá)下調(diào)，；與慢性睡眠剝奪模型組比較，舒樂安定組和酸棗仁湯組VIP、AVP mRNA表達(dá)上調(diào)。
　　免疫組織化學(xué)染色結(jié)果與環(huán)境對(duì)照組比較，慢性睡眠剝奪模型組AVP、VIP表達(dá)減少，nNos、c-fos表達(dá)增加（P<0.05）；與慢性睡眠剝奪模型組比較，舒樂安定組和酸棗仁湯組AVP、VIP表達(dá)增加，nNos、c-fos表達(dá)減少（P<0.05

8、）。
　　3.酸棗仁湯對(duì)老年慢性睡眠剝奪大鼠VLPO系統(tǒng)的影響
　　與環(huán)境對(duì)照組比較，慢性睡眠剝奪模型組下丘腦5-HT1AmRNA表達(dá)下調(diào)，5-HT2AmRNA表達(dá)上調(diào)；與慢性睡眠剝奪模型組比較，舒樂安定組和酸棗仁湯組下丘腦5-HT1AmRNA表達(dá)上調(diào)，5-HT2AmRNA表達(dá)下調(diào)。
　　與環(huán)境對(duì)照組比較，慢性睡眠剝奪模型組下丘腦GABAARα1、GABAARγ2 mRNA表達(dá)水平上調(diào)；與慢性睡眠剝奪模型組比較，舒樂安

9、定組和酸棗仁湯組GABAARα1、GABAARγ2 mRNA表達(dá)水平下調(diào)。
　　與環(huán)境對(duì)照組比較，慢性睡眠剝奪模型組GABA、甘丙肽表達(dá)減少（P<0.05）；與慢性睡眠剝奪模型組比較，舒樂安定組和酸棗仁湯組大鼠下丘腦GABA、甘丙肽表達(dá)增加（P＜0.05）。
　　熒光分光光度法檢測(cè)大鼠下丘腦部位5-HT含量結(jié)果分析與環(huán)境對(duì)照組相比較，慢性睡眠剝奪模型組5-HT相對(duì)表達(dá)量降低（P<0.05）。與慢性睡眠剝奪模型組相比較，舒樂安

10、定組和酸棗仁湯組5-HT含量有不同程度的升高（P<0.05）。
　　尼氏染色法檢測(cè)VLPO神經(jīng)元表達(dá)結(jié)果環(huán)境對(duì)照組大鼠VLPO神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)正常，排列緊密，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞核呈圓形或橢圓形，核仁清晰，胞質(zhì)內(nèi)可見豐富的尼氏小體。慢性睡眠剝奪后大鼠染色情況發(fā)生明顯變化，細(xì)胞排列疏松，部分神經(jīng)元胞體皺縮，胞質(zhì)內(nèi)尼氏小體減少。
　　免疫熒光染色法檢測(cè)GABA、甘丙肽表達(dá)的結(jié)果與環(huán)境對(duì)照組相比，慢性睡眠剝奪模型組GABA、甘丙肽神經(jīng)