蜘蛛體內Wolbachia的分子檢測及基于wsp基因的系統發(fā)育分析.pdf

1、沃爾巴克氏體是廣泛分布于節(jié)肢動物體內的一類細胞質遺傳共生菌,最早于1924年在尖音庫蚊Culex peiens的生殖組織內發(fā)現,并將其命名為Wolbachia pipientis。Wolbachia參與了多種調控其寄主生殖活動的機制,包括誘導胞質不親合、誘導孤雌生殖、誘導雌性化、殺雄以及增強雌性繁殖力和雄性生育力等。研究Wolbachia對于了解節(jié)肢動物的生殖生物學、性別決定機制、物種進化及人工調控它們的生殖行為等方面都有重大意義。

2、 本研究以湖北省武漢地區(qū)常見的蜘蛛類群為試驗對象,首次報道了中國蜘蛛體內Wolbacia的感染情況。采用Wolbachia的表面蛋白(WSP)基因wsp的通用引物對武漢地區(qū)11個科共31種常見蜘蛛體內Wolbachia的感染進行了分子檢測。結果表明黃金肥蛛Larinia argiopiformis、斜紋貓蛛Oxyopes sertatus、卡氏毛園蛛.Eriovixia cavaleriei、八斑鞘腹蛛Coleosoma octom

3、aculatum、大腹園蛛Araneus ventricosus、隱匿幽靈蛛Pholcus crypticolens和棒絡新婦Nephila clavata共7種蜘蛛中有Wolbachia的共生。每種蜘蛛隨機挑選30頭以測定它的個體感染率。個體感染率最高的是斜紋貓蛛73.3％(22/30),最低的是八斑鞘腹蛛13.3％(4/30)。通過克隆測序,得到了7條wsp基因序列,遞交到Genbank上并成功獲得了注冊號,分別為EU423911,

4、EF612771,DQ778738,EU423909,EU423910,EF612773和EF612772。將7種蜘蛛的wsp基因序列進行比對發(fā)現黃金肥蛛、大腹園蛛和卡氏毛園蛛這三種蜘蛛的wsp基因序列非常相似,彼此之間只有3個堿基的區(qū)別。在已知有Wolbachia感染的蜘蛛中,選取兩組特定類群(A和B類群)的wsp基因特異性引物進行PCR擴增,以確定它們感染的類群,同時檢測它們中是否存在超感染現象。使用的A類群引物是136F和691R

5、,B類群的引物是81F和522R。檢測結果發(fā)現大腹園蛛、卡氏毛園蛛、黃金肥蛛和隱匿幽靈蛛運用A類群引物擴增出550bp左右的目的基因片段,說明以上蜘蛛體內的Wolbachia屬于A類群。在斜紋貓蛛、八斑鞘腹蛛體內擴增出440bp左右的目的基因片段,說明它們體內的Wolbachia屬于B類群。而運用A類群和B類群特異性引物均能從棒絡新婦體內擴增出目的片段,說明它被兩種Wolbachia感染,棒絡新婦體內存在超感染現象。最后利用已獲得的ws