T細胞免疫球蛋白黏蛋白3在結直腸癌中的表達及意義.pdf

1、目的：
　　結直腸癌是目前最常見并具有高死亡率的消化道惡性腫瘤之一，它的發(fā)生發(fā)展是一個多步驟、多階段及多基因參與的細胞遺傳性疾病。但隨著對結直腸癌發(fā)病機制的進一步研究發(fā)現(xiàn)免疫細胞在結直腸癌組織內(nèi)的功能減弱或喪失和腫瘤的免疫逃逸機制，使機體不能發(fā)揮應有的免疫效應如:識別腫瘤抗原、清除腫瘤細胞，從而導致腫瘤的發(fā)生和進展。T細胞，尤其是細胞毒性T細胞在腫瘤免疫中發(fā)揮最主要的作用。然而，腫瘤患者體內(nèi)的T細胞尤其是在腫瘤組織中的T細胞處于T

2、細胞功能紊亂甚至沒有免疫功能—即“T細胞功能耗竭”的狀態(tài)。目前對于導致這種現(xiàn)象的機制研究尚不清楚。T細胞免疫球蛋白黏蛋白3是Tim家族的一個新成員。研究發(fā)現(xiàn)Tim-3在病毒感染和腫瘤免疫反應負性調(diào)節(jié)中起了重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)，Tim-3可致腫瘤患者體內(nèi)的T細胞功能紊亂和耗竭，以Tim-3為靶點治療可以部分恢復HCV和HIV患者T細胞的免疫功能。近來，另有研究顯示:Tim-3蛋白高表達惡性腫瘤患者的預后差。在黑色素瘤動物模型上用Tim-3

3、單抗進行治療可以抑制黑色素瘤的生長、侵襲、遷移。然而，對于Tim-3表達和結直腸腫瘤的關系目前仍不清楚。我們的研究目的是:
　　1.研究Tim-3在結直腸癌的表達與預后的關系，進一步推測Tim-3在結直腸癌發(fā)生發(fā)展中所起的作用，從而為后續(xù)研究奠定基礎。
　　2.將Tim-3的表達和相關通路聯(lián)系起來，探討可能的致瘤和導致腫瘤進展的機制。
　　3.將Tim-3蛋白的表達和臨床病理因素的關系進行分析，并探討可能影響結直腸癌預

4、后的危險因素。
　　方法：
　　1.通過Western blot，實時定量聚合酶連鎖反應(quantificational real-timepolymerase chain reaction，qRT-PCR)和細胞免疫化學來探究Tim-3在四種結直腸癌細胞株(HT-29，HCT116，LoVo，SW620)中的表達，并運用蛋白免疫印跡方法分析STAT3和pSTAT3在結直腸癌細胞系的表達。
　　2.收集結直腸癌患者術

5、后腫瘤組織和配對的正常組織各201例，制備成組織切片。通過免疫組化的方法來分析Tim-3在腫瘤組織的表達。收集結直腸癌患者的臨床病理資料（包括:性別、年齡、腫瘤分化、脈管癌栓、腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移、遠處轉移、TNM分期）并統(tǒng)計分析其與Tim-3表達的相關性，進一步探討影響結直腸癌預后的相關因素分析。
　　結果：
　　1.在結直腸癌細胞系中Tim-3在mRNA表達水平上無差異，而在蛋白表達水平上有顯著差異。另外，本研究參與

6、的細胞系均表達STAT3，但只有HCT116表達pSTAT3。免疫細胞化學顯示:Tim-3蛋白表達于HT-29和SW620的細胞質(zhì)和細胞核，而表達于HCT116和LoVo的細胞質(zhì)。
　　2.在結直腸癌組織和正常組織中的結果顯示:92.5％的結直腸癌標本表達Tim-3，其中58.7％的標本Tim-3表達的HSCORE計數(shù)≥200，33.8％的腫瘤組織Tim-3表達HSCORE計數(shù)＜200，7.4％的結直腸癌標本無Tim-3表達。86

7、.6％的正常組織表達Tim-3。然而，結直腸癌組織表達的Tim-3蛋白明顯高于正常組織(P＜0.0001)。
　　3.Tim-3蛋白的表達和淋巴結轉移數(shù)目、TNM分期存在密切關系（所有P＜0.0001）。然而Tim-3蛋白與患者的性別、年齡、脈管癌栓、腫瘤的分化程度、腫瘤的浸潤深度及遠處轉移情況無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。盡管Tim-3蛋白的表達和腫瘤的浸潤深度無統(tǒng)計學差異，我們的研究發(fā)現(xiàn)Tim-3蛋白的表達水平在分化中/低和T

8、3/T4的患者中顯著高于分化程度好和T1/T2的患者。
　　4.根據(jù)結直腸癌患者的隨訪數(shù)據(jù)顯示:54例患者死于結直腸癌(26.9％)。在死亡的病例中，Tim-3蛋白表達HSCORE計數(shù)≥200的結直腸癌患者的103個月的生存率明顯短于Tim-3蛋白表達HSCORE計數(shù)＜200的結直腸癌患者(P＜0.0001，log-rank test)。TNM分期(P=0.003)、遠處轉移(P=0.011)、脈管癌栓(P=0.002)和Tim-

9、3蛋白表達(P＜0.0001)可以作為結直腸癌患者預后獨立的危險因素。
　　結論：
　　本研究證實了結直腸癌細胞表達Tim-3。此外，我們研究發(fā)現(xiàn)Tim-3蛋白的表達強度可以作為結直腸癌患者判斷預后的獨立危險因素。另外，結直腸癌細胞系表達STAT3和pSTAT3，為我們對Tim-3后續(xù)的研究奠定了基礎。本研究也讓我們對結直腸癌的預后相關因素有了更深的認識，將脈管癌栓、遠處轉移、分期和Tim-3蛋白表達結合起來作為判斷結直腸癌