端粒DNA長度動態(tài)改變與重度抑郁癥相關(guān)性研究及鈣成像技術(shù)的建立.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行論述：
　　一、端粒DNA長度動態(tài)改變與重度抑郁癥相關(guān)性研究
　　重度抑郁癥(major depressive disorder, MDD)作為一種情緒相關(guān)的精神疾病，常伴隨著諸多中樞神經(jīng)系統(tǒng)的退行性改變，如記憶力減退、獎賞功能異常等。以往大量研究表明，MDD患者外周血白細(xì)胞端粒長度顯著縮短，提示端粒長度改變與MDD的發(fā)生存在相關(guān)性。但由于抑郁癥發(fā)病主要受中樞神經(jīng)系統(tǒng)控制，外周血的端粒長度改變未必能準(zhǔn)確反

2、映中樞的相關(guān)變化，因此直接檢測與抑郁癥發(fā)病相關(guān)的腦區(qū)、核團(tuán)更為重要。然而，由于患者腦組織不易獲得，因此關(guān)于腦區(qū)端粒長度與抑郁癥之間關(guān)系的研究非常匱乏。而抑郁癥模型小鼠作為研究抑郁癥的重要工具鼠，可以有效彌補(bǔ)臨床樣本研究的諸多限制。
　　研究目的：
　　探索抑郁癥相關(guān)核團(tuán)、腦區(qū)的端粒長度改變，探討其端粒長度改變與抑郁癥之間的關(guān)系。
　　研究方法:
　　在本研究中，通過建立慢性不可預(yù)知應(yīng)激（chronic unpre

3、dictable stress，CUS）、慢性束縛(chronic restraint stress，CRS)和社會挫敗(social defeat，SD)三種抑郁癥動物模型，以qPCR定量檢測模型鼠外周血端粒長度改變。并進(jìn)一步選擇與MDD發(fā)病高度相關(guān)的前額葉皮層、杏仁核、海馬體、下丘腦室旁核及伏隔核五個核團(tuán)，檢測端粒在CUS模型鼠的這五個核團(tuán)的動力學(xué)變化。此外，我們還檢測了重度抑郁癥患者和正常對照的外周血細(xì)胞的端粒，通過兩組之間端粒長

4、度的差異，間接確定該檢測方法的可行性。
　　研究結(jié)果：
　　結(jié)果顯示，CUS模型鼠外周血端粒長度(n=11，T/S=1.11±0.21)相對于正常對照(n=21，T/S=0.93±0.21)顯著縮短(p=0.0295)，同時該模型鼠前額葉皮層(CTLn=12，T/S=0.72±0.12; CUS n=22 T/S=0.87±0.13，p=0.004)和杏仁核(CTL n=12，T/S=0.54±0.05; CUS n=22，

5、T/S=0.59±0.05，p=0.011)的端粒均顯著長于正常對照;MDD患者外周血的端粒長度(n=48，T/S=2.21±0.90)相對于正常對照(n=50，T/S=1.12±0.50)顯著縮短(p＜0.0001)。
　　研究結(jié)論：
　　因抑郁模型小鼠外周血與患者外周血端粒表現(xiàn)出相同的縮短趨勢，提示可用CUS模型小鼠代表MDD患者研究抑郁癥與端粒的關(guān)系?？紤]到端粒DNA延長的機(jī)制主要為端粒酶和端粒選擇性延長兩種，而后者僅

6、存在于少數(shù)腫瘤細(xì)胞中，因此推測前額葉皮層和杏仁核的端粒酶活性均上調(diào)。并進(jìn)一步推測兩個核團(tuán)表達(dá)的端粒酶在抑郁癥中發(fā)揮著除維持端粒長度之外的其他重要作用。
　　二、利用鈣成像技術(shù)在體檢測神經(jīng)元活動
　　腦作為機(jī)體最為復(fù)雜的器官，擁有紛繁的神經(jīng)聯(lián)系及激活模式，這給腦功能及腦與情緒、行為關(guān)系的精確闡述造成障礙。而通過鈣成像技術(shù)可以實時檢測并記錄神經(jīng)元活動，這對于探索控制行為所涉及的腦區(qū)神經(jīng)環(huán)路的研究具有重要意義。
　　研究目的

7、：
　　在實驗室建立鈣成像技術(shù)平臺，實現(xiàn)在體檢測神經(jīng)元活動。
　　研究方法：
　　包裝并純化aav-Syn1-GCaMP6f-P2A-Tomato腺相關(guān)病毒，培養(yǎng)元代神經(jīng)元，體外驗證病毒;注射病毒于小鼠伏隔核，在動物清醒狀態(tài)下給予束縛刺激，實時記錄伏隔核的神經(jīng)元活動;對檢測后的鼠腦切片，進(jìn)一步觀察病毒表達(dá)。
　　研究結(jié)果：
　　表達(dá)GCaMP6f的原代神經(jīng)元在給予谷氨酸刺激后，神經(jīng)元被活化，Ca2+內(nèi)流而產(chǎn)