德國(guó)小蠊變應(yīng)原浸液中致敏蛋白Bla g2的檢測(cè)與研究.pdf

1、本文研究目的：制備德國(guó)小蠊變應(yīng)原浸液，并對(duì)其主要致敏蛋白組分Bla g 2進(jìn)行鑒定，同時(shí)確定變應(yīng)原浸液中Bla g 2的含量。 研究方法：用碳酸氫鹽一鹽水提取液(pH8.2)制備德國(guó)小蠊變應(yīng)原浸液，通過(guò)SDS-PAGE對(duì)其蛋白組分進(jìn)行分離，利用Western blotting方法鑒定浸液中的主要致敏蛋白組分——Bla g 2；在Ecoli中表達(dá)Bla g 2-GST融合蛋白，并用其純化產(chǎn)物作為抗原免疫新西蘭白兔，制備兔抗Bla

2、g 2血清；分別采用ELISA和Western blotting方法檢測(cè)兔抗血清的效價(jià)和特異性，并通過(guò)Western blotting方法檢測(cè)兔抗血清和變應(yīng)原浸液中Bla g 2的反應(yīng)性，采用ELISA方法建立Bla g 2的標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定變應(yīng)原浸液中Bla g 2的含量。 研究結(jié)果：用碳酸氫鹽一鹽水提取液(pH8.2)按照1：25的浸提比例、72h的浸提時(shí)間可以制備出較理想的德國(guó)小蠊變應(yīng)原浸液；SDS-PAGE顯示

3、德國(guó)小蠊變應(yīng)原浸提產(chǎn)物中含有分子量大小約為36kDa的蛋白條帶，Western blotting結(jié)果表明浸液可以分別與蜚蠊過(guò)敏患者的血清和Bla g 2的抗血清反應(yīng)，在36kDa左右處有雜交條帶，證明該蛋白即為Bla g 2；ELISA測(cè)定浸提產(chǎn)物中Bla g 2的濃度約為1.16μg/ml。 研究結(jié)論：本研究成功地制備了德國(guó)小蠊變應(yīng)原浸液，并對(duì)浸液中的主要致敏蛋白組分Bla g 2進(jìn)行了定性和定量檢測(cè)。將此結(jié)果與浸液生物活性的