水中大鼠尸體軟組織生物力學(xué)性狀及臟器量化病理形態(tài)時(shí)序性變化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景與目的：
　　死亡時(shí)間( Postmortem Interval, PMI)推斷是法醫(yī)學(xué)界研究的重點(diǎn)和難點(diǎn),其對(duì)兇犯的確定、刑事案件的偵破,以及死亡醫(yī)療糾紛,甚至遺產(chǎn)繼承的仲裁等司法審判實(shí)踐有著非常重要的意義。傳統(tǒng)推斷PMI的方法已有許多研究,包括根據(jù)早期尸體現(xiàn)象、胃內(nèi)容物消化程度等多種方法推斷早期PMI;根據(jù)尸體腐敗程度、蠅蛆生長(zhǎng)規(guī)律等推斷晚期PMI。但這些方法由于影響因素多、檢測(cè)方法繁雜等問(wèn)題,均存在較大的誤差。近年來(lái),較

2、多研究利用DNA和蛋白質(zhì)降解的分子生物學(xué)技術(shù)推斷PMI,認(rèn)為是比較準(zhǔn)確可靠的方法,但其依然受到自身和外界多重因素的影響,且操作復(fù)雜,尚處于研究階段。
　　PMI推斷的研究,實(shí)驗(yàn)條件的控制非常重要。本實(shí)驗(yàn)在課題組其他成員的空氣中大鼠PMI研究基礎(chǔ)上,以水中尸體為研究對(duì)象,控制溫度、空氣流通度等實(shí)驗(yàn)條件,期望探討水中尸體軟組織的生物力學(xué)性狀的時(shí)序性變化與PMI關(guān)系的規(guī)律,將法醫(yī)生物力學(xué)理論和技術(shù)引入到PMI推斷中,進(jìn)一步豐富法醫(yī)生物力

3、學(xué)(forensic biomechanism)的研究?jī)?nèi)容和開拓PMI推斷新技術(shù)方法。同時(shí),本實(shí)驗(yàn)利用CDIA技術(shù),觀測(cè)常規(guī)HE染色的肝細(xì)胞病理圖像并進(jìn)行體視學(xué)分析與量化處理,結(jié)合水中尸體主要臟器的病理形態(tài)的系統(tǒng)觀察,期望為PMI推斷提供新思路和參考依據(jù)。
　　材料與方法：
　　清潔級(jí)健康雄性SD大鼠80只,3~3.5月齡,體重250-300g,頸脫位法處死,按死后不同時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)分為0h、6h、12h、18h、24h、30h

4、、36h、42h、48h、60h、72h、96h、120h、144h、168h、192h共16組,每組5只。立即放置于2/3滿在GXZ型智能光照培養(yǎng)箱中25±0.5℃恒溫的自來(lái)水塑料桶,讓其自然腐敗,分別于上述時(shí)間點(diǎn)提取胸部正中皮膚1×4cm2、腹壁白線右側(cè)1cm處腹壁肌肉1×4cm2、直腸上4~10cm處結(jié)腸、胃下6~12cm處小腸進(jìn)行生物力學(xué)指標(biāo)檢測(cè),每個(gè)時(shí)間點(diǎn)5只,檢測(cè)其極限載荷、最大應(yīng)力、應(yīng)變等軟組織生物力學(xué)指標(biāo)。同時(shí)選取0h、

5、12h、24h、36h、48h、72h腦、心、肝、腎、肺切片HE染色并進(jìn)行鏡下觀察,觀察各組織自溶腐敗的形態(tài)學(xué)變化,并對(duì)大鼠肝細(xì)胞進(jìn)行病理學(xué)圖像體視學(xué)分析和量化處理,檢測(cè)肝細(xì)胞的核面積、核漿比、核漿光密度比和核異形指數(shù),用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理和分析,探討其形態(tài)時(shí)序性變化規(guī)律及其與PMI的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.主要臟器組織形態(tài)學(xué)改變
　　水中大鼠尸體經(jīng)尸僵、腐敗靜脈網(wǎng)、尸綠、腹部膨隆至塌陷約需8天。HE染色鏡

6、下觀察,各臟器均呈現(xiàn)時(shí)序性變化。腦0-24h神經(jīng)元細(xì)胞核固縮,24-48h核擴(kuò)大至腦液化。心0-24h肌漿腫脹、肌間隙增寬,24-48h肌漿模糊、斷裂,肌細(xì)胞核明顯減少,48-72h心肌細(xì)胞核消失;肝0-24h肝細(xì)胞腫脹,24-48h肝細(xì)胞間隙變小至邊界不清,核固縮、碎裂,48-72h僅殘留少量細(xì)胞核碎片。腎0-24h近曲小管上皮細(xì)胞嗜酸性增強(qiáng),24-72h腎小管、腎小球細(xì)胞核相繼固縮、碎裂、溶解消失,96h細(xì)胞核完全消失。肺0-24h

7、肺泡上皮細(xì)胞胞漿淡染,24-48h肺泡上皮細(xì)胞核固縮、碎裂、明顯減少,48-72h肺泡腔漿液淤積至肺組織完全破碎、結(jié)溝不清。各臟器比較,腦自溶、腐敗最快,肝、心、肺其次,腎自溶腐敗最慢。其中,腦48h即已液化無(wú)法取材切片,肝、心、肺72h組織結(jié)構(gòu)基本消失,腎組織自溶腐敗速度較慢,96h細(xì)胞核基本消失,120h組織輪廓不清。
　　2.生物力學(xué)測(cè)試與分析結(jié)果
　　2.1.極限載荷
　　各組織極限載荷均值大小排序?yàn)?皮膚(1

8、4.71N)>大腸(3.96N)>肌肉(3.85N)>血管(1.97N)>小腸(1.27N)。
　　各組織總體均呈死后時(shí)序性下降趨勢(shì),下降速度在各時(shí)間點(diǎn)存在差異。皮膚0-18h下降迅速(直線回歸方程為YPMI=33.087-1.3121XML,r=-0.999),相鄰點(diǎn)間差異顯著(P<0.01),18-36h、96-168h呈緩慢下降趨勢(shì)(YPMI=120.153-9.009XML,r=-0.965;YPMI=13.822-0.0

9、485XML, r=-0.941),P<0.05。36-96h、168-192h相鄰時(shí)間點(diǎn)差別不明顯(P>0.05)。肌肉0-24h、96-168h下降趨勢(shì)明顯,其直線回歸方程分別為YPMI=42.914-4.9861XML,r=-0.989;YPMI=177.6-24.289XML,r=-0.970。24-96h為“平臺(tái)期”,168-192h比較差異不明顯(P>0.05)。大腸0-36h、72-192h(YPMI=66.238-8.6

10、983XML,r=-0.981;YPMI=225.14-41.488XML,r=-0.978)下降趨勢(shì)明顯(P<0.05),36-72h為“平臺(tái)期”。小腸0-18h(YPMI=53.903-27.422XML, r=-0.968)、120-192h(YPMI=350.55-200.57XML,r=-0.986)下降趨勢(shì)明顯,18-120h為“平臺(tái)期”(P>0.05)。血管全程變化趨勢(shì)不明顯。
　　2.2.應(yīng)變
　　血管應(yīng)變最

11、大為3.96,但變化趨勢(shì)不明顯。小腸最小為0.34。皮膚、肌肉、大腸、小腸總體均呈下降趨勢(shì)。
　　皮膚0-48h下降迅速,YPMI=88.894-77.665XSR,r=-0.962(P<0.01)。48-192h為“平臺(tái)期”。肌肉0-30h下降迅速,YPMI=52.112-41.544 XSR,r=-0.970(P<0.01),30-192h
　　為“平臺(tái)期”(P>0.05)。大腸0-24h下降迅速,YPMI=59.106

12、-55.031XSR,r=-0.962。24-72h為“平臺(tái)期”,72-192h下降趨勢(shì)明顯(P<0.01),YPMI=307.03-346.59 XSR,r=-0.993。小腸0-24h下降迅速,YPMI=56.758-87.079 XSR,r=-0.949(P<0.01),24h-192h為”平臺(tái)期”。
　　3.肝臟細(xì)胞病理圖像量化處理
　　肝細(xì)胞核面積各時(shí)間段的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　肝細(xì)胞核漿

13、比呈下降趨勢(shì),其直線回歸方程為 YPMI=0.3683-0.0045XRKC,r=-0.9361。其中12-24h下降速率最大,0-12h、24-72h下降速度較慢。各相鄰時(shí)間點(diǎn)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　核漿光密度比,0-36h呈逐漸上升趨勢(shì)(Y=69.751X-78.117,r=0.982),36-72h呈逐漸下降趨勢(shì)( Y=198.44-97.676X,r=-0.999),各相鄰時(shí)間點(diǎn)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

14、<0.05)。
　　異形指數(shù)呈上升趨勢(shì)(YPMI=30.177XRKC-31.707,r=0.989),12-36h上升速度最大,其次為0-12h(P<0.05),48-72h差異不明顯(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、水尸各器官組織形態(tài)的時(shí)序性變化與 PMI之間存在明顯的相關(guān)性,其主要為自溶和腐敗的結(jié)果,與空氣中尸體比較,自溶和腐敗約晚12小時(shí),提示日常法醫(yī)病理學(xué)檢驗(yàn)時(shí),應(yīng)注意鑒別生前彌漫性病變與死后自溶腐敗性

15、變化,還應(yīng)綜合考慮尸體腐敗環(huán)境。水尸72h內(nèi)為自溶、腐敗高峰期,應(yīng)爭(zhēng)取盡早尸檢或冷凍保存尸體。
　　2、水尸皮膚、肌肉、小腸和結(jié)腸各器官組織的生物力學(xué)性狀存在時(shí)序性變化規(guī)律,特別是各自均存在一段明顯的線性相關(guān)的“窗口期”和相互彌補(bǔ)性,提示軟組織生物力學(xué)指標(biāo)及其檢測(cè)方法可以作為推斷死亡時(shí)間的一種簡(jiǎn)便、客觀、量化的檢測(cè)手段。
　　3、病理學(xué)圖像量化分析技術(shù)檢測(cè)的常規(guī)HE組織細(xì)胞各種描述指標(biāo),可以量化地反映死后組織細(xì)胞自溶腐敗的形