腸道病毒71型病毒性心肌炎小鼠模型的建立及3-氮唑核苷的干預(yù).pdf

1、目的：
　　建立腸道病毒71型（Enterovirus71，EV71）AH12206株感染1日齡BALB/c小鼠的病毒性心肌炎模型，觀察小鼠感染EV71后的發(fā)病情況，同時(shí)使用3-氮唑核苷對(duì)該模型進(jìn)行干預(yù)性治療，觀察用藥后小鼠的臨床變化，測(cè)量血清學(xué)指標(biāo)，觀察心肌病理改變，評(píng)估藥物療效，為該藥臨床應(yīng)用提供一定的指導(dǎo)。
　　方法：
　　本實(shí)驗(yàn)主要采取體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，分為兩個(gè)部分：（一）確定合適的病毒感染量：隨機(jī)選取1日齡BALB/

2、c乳鼠40只（4窩），隨機(jī)分為4組，每組10只。隨機(jī)選取1組作為空白對(duì)照組，腹腔注射Vero細(xì)胞培養(yǎng)懸液0.1mL/只，其余3組分別腹腔注射不同濃度的EV71病毒液0.1ml/只，觀察小鼠感染后的發(fā)病情況，定期處死小鼠，檢測(cè)血清心肌酶活力及心肌病理改變，以CK-MB升高及心肌炎癥浸潤(rùn)作為造模成功指標(biāo)，從而得出建立EV71病毒性心肌炎模型所需的合適病毒感染量。（二）使用3-氮唑核苷進(jìn)行干預(yù)性治療，評(píng)估藥物療效：選取60只體重相當(dāng)?shù)?日齡B

3、ALB/c小鼠（6窩），分為6組，每組10只，隨機(jī)抽取2組作為正常對(duì)照組和3-氮唑核苷藥物對(duì)照組，分別腹腔注射Vero細(xì)胞懸液0.1ml/只，其余小鼠腹腔注射104TCID50的EV71病毒0.1 ml/只，之后再隨機(jī)分為4組，即模型組、3-氮唑核苷高、中、低劑量組，各劑量組分別通過(guò)腹腔注射給予100 mg/kg、10 mg/kg、1.0 mg/kg的3-氮唑核苷進(jìn)行干預(yù)治療，正常對(duì)照組腹腔注射生理鹽水0.1 ml/只，藥物對(duì)照組則給予

4、100 mg/kg的3-氮唑核苷，各組每日給藥1次，連續(xù)給藥7次（即7 d）。觀察給藥后小鼠的發(fā)病情況，定期處死小鼠，采集心臟標(biāo)本進(jìn)行心臟組織的病毒分離及RT-PCR鑒定，觀察心臟組織病理改變，檢測(cè)血清心肌酶CK-MB水平。
　　結(jié)果：
　　（一）腹腔注射接種EV71后，小鼠較正常對(duì)照組體型增長(zhǎng)緩慢（偏?。?～3d出現(xiàn)精神差、易激惹、活動(dòng)減少，4～5d出現(xiàn)嗜睡、后肢癱瘓及共濟(jì)失調(diào)等癥狀，5～7d出現(xiàn)死亡。通過(guò)心肌組織的病毒

5、分離、RT-PCR鑒定、組織病理學(xué)變化、血清心肌酶（CK-MB）異常升高等指標(biāo)證明造模成功，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明104TCID50能成功建立病毒性心肌炎模型，即本實(shí)驗(yàn)所需的合適病毒感染量為104TCID50。
　?。ǘ?-氮唑核苷各劑量組小鼠的發(fā)病癥狀較模型組有所減輕，小鼠心肌酶CK-MB含量及死亡率有所降低，與模型組比較有差異（P<0.05），其中以3-氮唑核苷高劑量組最為顯著。此外，3-氮唑核苷各劑量組小鼠心肌炎性和壞死等病理改變均

6、明顯輕于模型組，其中高劑量組較低劑量組的炎癥改變減輕。
　　結(jié)論：
　　EV71 AH12206株通過(guò)腹腔注射途徑能使1日齡BALB/c小鼠感染致病毒性心肌炎，此動(dòng)物模型可用于EV71感染后病毒性心肌炎的致病機(jī)制和抗病毒藥物治療的研究。3-氮唑核苷可以明顯改善EV71致病毒性心肌炎的臨床癥狀，能顯著提高病毒性心肌炎小鼠的生存率，降低血清心肌酶CK-MB水平，減輕心肌細(xì)胞的損害程度，減輕心肌病理改變，促進(jìn)病情緩解，有一定的治療