維生素D受體在病毒性心肌炎小鼠心肌中的表達(dá).pdf

1、目的：通過(guò)建立病毒性心肌炎（viral myocarditis, VMC）動(dòng)物模型，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)維生素D受體（vitamin D receptor, VDR）在VMC小鼠心肌中的表達(dá)水平。進(jìn)一步觀察VDR在VMC小鼠心肌中的表達(dá)與小鼠心肌炎性病理改變的相關(guān)性。探討VDR參與小鼠VMC免疫炎性機(jī)制的可能作用。
　　方法：將人喉癌上皮細(xì)胞Hep-2細(xì)胞復(fù)蘇傳代，用柯薩奇 B3病毒(coxsackievirus B3, CV B3)感染該細(xì)

2、胞，擴(kuò)增病毒，增加病毒毒力，當(dāng)達(dá)到一定毒力后，測(cè)定CVB3的半數(shù)組織感染劑量(50％tissue culture infective dose,TCID50)，收集病毒備用。選取120只4周齡雄性BALB/c無(wú)特定病原體級(jí)（SPF）小鼠，隨機(jī)分為兩組，實(shí)驗(yàn)組80只，對(duì)照組40只。其中實(shí)驗(yàn)組80只小鼠腹腔注射適量CVB3制備VMC模型，對(duì)照組40只小鼠則腹腔注射等量的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液。密切觀察小鼠生長(zhǎng)情況，分別在腹腔注射后第3d、7d、

3、14d和28d,實(shí)驗(yàn)組各處死15只小鼠，對(duì)照組則各處死10只小鼠，取得小鼠的心臟標(biāo)本。用免疫組織化學(xué)技術(shù)（immunohistochemitry, IHC）檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組小鼠心肌組織的VDR的動(dòng)態(tài)表達(dá)情況，并與相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組小鼠VDR表達(dá)情況對(duì)比分析；用HE染色觀察小鼠心肌的病理變化,進(jìn)行心肌病理評(píng)分。探討分析VMC小鼠心肌VDR的表達(dá)與心肌病理變化之間的相關(guān)性。
　　結(jié)果：（1）Balb/c雄性小鼠經(jīng)腹腔注射CVB3成功制備VMC

4、小鼠模型。實(shí)驗(yàn)組小鼠在注射病毒3d后，活動(dòng)量、飲食量開(kāi)始減小，出現(xiàn)掉毛現(xiàn)象；注射病毒第7d左右，小鼠精神萎靡，毛發(fā)稀疏，體格消瘦，小鼠共死亡19只，為死亡高峰期，統(tǒng)計(jì)死亡率為23.75%。對(duì)照組小鼠則精神、飲食和活動(dòng)情況良好，無(wú)明顯掉毛現(xiàn)象，沒(méi)有出現(xiàn)死亡。在小鼠處死取出心臟標(biāo)本后，CMV實(shí)驗(yàn)組小鼠心臟外膜可見(jiàn)到明顯壞死病灶，呈現(xiàn)不規(guī)則圖形的白斑。而對(duì)照組小鼠心臟未見(jiàn)壞死的白斑。
　?。?）經(jīng)HE染色，對(duì)小鼠心肌組織進(jìn)行組織病理學(xué)觀

5、察。在病毒接種后第3d，小鼠心肌細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)少量炎癥細(xì)胞侵潤(rùn)；在第7d時(shí)，小鼠心肌組織炎癥壞死達(dá)到高峰，可見(jiàn)心肌溶解，出現(xiàn)了大片的壞死病灶；在病毒接種后第14d，心肌局部炎癥、壞死病灶可見(jiàn)吸收。第28d時(shí)，小鼠心肌大部分壞死病灶已吸收。對(duì)照組小鼠心肌排列整齊，無(wú)炎癥浸潤(rùn)。
　?。?）接種病毒的實(shí)驗(yàn)組小鼠心肌組織，經(jīng)IHC染色后，可觀察到VDR表達(dá)顯著升高。并在病毒注射第7d時(shí)，VDR表達(dá)水平達(dá)到高峰，染色加強(qiáng)，隨后逐漸下降，但在第

6、28d時(shí)仍處于較高水平。在第3d、7d、14d和28d，實(shí)驗(yàn)組小鼠VDR表達(dá)水平分別為：2.39±0.23、5.45±0.30、4.19±0.26、2.52±0.28。對(duì)照組小鼠在第3d、7d、14d和28d，VDR表達(dá)水平則分別為：1.64±0.23、1.66±0.19、1.68±0.29、1.64±0.36。各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組小鼠VDR表達(dá)水平均高于對(duì)照組，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　?。?）對(duì)實(shí)驗(yàn)組小鼠心肌 VD