藏荊芥乙酸乙酯部位化學(xué)成分及抗炎、鎮(zhèn)痛活性研究.pdf

1、藏荊芥（Nepeta angustifolia C.Y.Wu），為唇形科荊芥屬植物，分布在海拔3600～4600米的山坡路邊、草地及林邊等地，分布于西藏中部及南部地區(qū)，主要產(chǎn)于西藏拉薩、江孜等地，是西藏地區(qū)特有的中草藥。西藏民間用花、葉入藥，擁有開(kāi)竅醒神、消炎止痛的功效，主要用來(lái)治療神魂驚厥、卒中、疼痛、出血性腦梗死、時(shí)疫及創(chuàng)傷等病癥。
　　目前，對(duì)藏荊芥的研究較少，收載于《西藏自治區(qū)地方藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中的藏荊芥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)其性狀

2、、炮制、性味及功能主治等方面進(jìn)行了闡述。對(duì)藏荊芥藥理活性及化學(xué)成分的研究幾乎處于空白狀態(tài)，其在臨床上的應(yīng)用也僅限于傳統(tǒng)處方，這嚴(yán)重阻礙了藏荊芥的進(jìn)一步發(fā)展。為了系統(tǒng)的研究藏荊芥的化學(xué)物質(zhì)及藥理功效，本文首先對(duì)藏荊芥醇提物不同極性部位的抗氧化能力進(jìn)行了研究，對(duì)其抗炎、鎮(zhèn)痛藥理功效進(jìn)行了研究，最后對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行了提取分離及結(jié)構(gòu)鑒定，主要內(nèi)容敘述如下：
　　(1)藏荊芥全草用70％乙醇浸提后，順序用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、

3、乙醇進(jìn)行萃取分離，減壓濃縮成浸膏，通過(guò)DPPH消除法、H2O2/Fe2+/水楊酸消除法、普魯士藍(lán)法分別測(cè)定各組分的抗氧化效應(yīng)、羥基自由基清除能力和還原能力，并同VC、蘆丁進(jìn)行對(duì)比。三種抗氧化實(shí)驗(yàn)表明，藏荊芥石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇萃取層都具有不同大小的抗氧化作用，萃取物的抗氧化功效與樣品濃度間具有較顯著的量效關(guān)系；在fenton法清除·OH自由基能力試驗(yàn)中，當(dāng)二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、正丁醇、石油醚提取物濃度達(dá)到1.0g

4、.L-1時(shí)，抗氧化能力均大于百分之六十，且乙酸乙酯在濃度達(dá)到0.7g.L-1時(shí)甚至高于其陽(yáng)性對(duì)照品的清除·OH自由基能力，為藏荊芥作為天然抗氧化劑和自由基清除劑提供了理論依據(jù)。
　　(2)本部分主要研究了藏荊芥不同溶劑萃取物的抗炎、鎮(zhèn)痛能力。將小鼠隨機(jī)分為7組，即空白對(duì)照組（給予生理鹽水）、陽(yáng)性對(duì)照組（分別給予潑尼松或阿司匹林），藏荊芥不同溶劑萃取層（水層、正丁醇層、乙酸乙酯層、二氯甲烷層、石油醚層）。經(jīng)二甲苯導(dǎo)致小鼠耳朵發(fā)炎腫脹

5、實(shí)驗(yàn)和腹膜炎實(shí)驗(yàn)研究不同萃取物的抗炎能力，經(jīng)小鼠醋酸扭體法及熱板法研究其鎮(zhèn)痛能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，陽(yáng)性對(duì)照組和給藥實(shí)驗(yàn)組小鼠的耳腫脹率、OD值、扭體次數(shù)、痛閾值都比相應(yīng)的空白組低。結(jié)果表明，藏荊芥不同溶劑萃取層提取物都具有不同程度的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，尤其是石油醚層、二氯甲烷層、乙酸乙酯層的效果最為明顯。
　　(3)將除雜后的藏荊芥全草18kg，剪切后至滲漉桶中，用70%乙醇，以物料比1:20(kg/L)滲漉提取15天，將提取液減壓蒸餾

6、濃縮至1:2(kg/L)，再順序用石油醚、乙酸乙酯、水飽和的正丁醇萃取分離，得藏荊芥石油醚、乙酸乙酯、水飽和的正丁醇、水層萃取層為220g、400g、750g、1500g。將乙酸乙酯層經(jīng)硅膠柱層析、凝膠柱層析、制備薄層、反相柱色譜、制備液相等分離手段進(jìn)行分成分離，對(duì)分離得到的化學(xué)成分經(jīng)核磁色譜等進(jìn)行鑒定，共確定11種化學(xué)成分，分別為齊墩果酸、白樺酸、熊果酸、β-谷甾醇、橙皮苷、異香檸檬烯、補(bǔ)骨脂酚、迷迭香酸甲酯、布盧門醇C葡糖苷、補(bǔ)骨脂

7、素和迷迭香酸。
　　(4)取藏荊芥不同藥用部位、荊芥藥材粉末，分別密封于頂空進(jìn)樣瓶中，通過(guò)頂空氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(HS-GC/MS)測(cè)定藏荊芥不同藥用部位（花穗、莖、葉及全草）與荊芥莖揮發(fā)性成分的不同，通過(guò)NIST標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)檢索各揮發(fā)性化合物，并通過(guò)面積歸一化法估算各化合物的相對(duì)百分含量，并比較其差異。結(jié)果證明，藏荊芥各藥用部位中揮發(fā)性化合物主要為荊芥內(nèi)酯（在莖中的含量為73.24%），其中以藏荊芥葉中化學(xué)成分最多，共鑒定出二十一