穿心蓮內(nèi)酯逆轉(zhuǎn)腸癌5-FU耐藥及其分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　5-氟尿嘧啶（5-FU）在結(jié)直腸癌一線化療方案中一直處于基石的地位，然而隨著應(yīng)用時(shí)間的延長，其療效往往受到腫瘤耐藥以及相關(guān)毒副反應(yīng)的限制。穿心蓮內(nèi)酯（Andrographolide）是爵床科植物穿心蓮中的二萜內(nèi)酯類化合物，眾多研究表明其具有抗菌、抗病毒、抗炎等藥理作用。在本研究中，我們探索了穿心蓮內(nèi)酯與5-FU聯(lián)用逆轉(zhuǎn)腸癌耐藥及其潛在的分子機(jī)制。
　　方法:
　　我們利用MTT和細(xì)胞凋亡檢測技術(shù)來檢測穿心蓮

2、內(nèi)酯聯(lián)合5-FU對耐藥細(xì)胞的抑制效果;除此之外，我們還在HCT116/5-FUR耐藥細(xì)胞裸鼠移植瘤模型上觀察了聯(lián)用的效果;利用免疫印跡和免疫組化技術(shù)探討在經(jīng)過穿心蓮內(nèi)酯和/或5-FU處理后的細(xì)胞和腫瘤組織中BAX蛋白的表達(dá)情況;利用藥物蛋白結(jié)合實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證穿心蓮內(nèi)酯與BAX蛋白的直接結(jié)合能力;利用免疫組化技術(shù)檢測人腸癌樣本中BAX蛋白的表達(dá)水平并分析其與疾病無進(jìn)展生存期(PFS)之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1、MTT和凋亡檢測

3、結(jié)果顯示穿心蓮內(nèi)酯可以部分逆轉(zhuǎn)耐藥細(xì)胞對5-FU的耐藥性。
　　2、小鼠移植瘤模型顯示，穿心蓮內(nèi)酯聯(lián)合5-FU明顯抑制小鼠耐藥腫瘤的生長，單用5-FU及穿心蓮內(nèi)酯抑制效果不明顯。
　　3、穿心蓮內(nèi)酯聯(lián)用5-FU明顯上調(diào)BAX蛋白的表達(dá)水平，體外細(xì)胞水平研究證實(shí)，穿心蓮內(nèi)酯逆轉(zhuǎn)腸癌5-FU耐藥依賴于上調(diào)BAX蛋白的表達(dá)，其上調(diào)機(jī)制的與作用于蛋白翻譯后途徑有關(guān)。
　　4、利用生物素蛋白垂釣及胞內(nèi)熱遷移實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)穿心蓮內(nèi)

4、酯直接靶向結(jié)合于BAX蛋白。
　　5、通過檢測分析人腸癌組織標(biāo)本發(fā)現(xiàn)，腸癌組織中BAX蛋白的表達(dá)水平與含5-FU的化療方案化療后的PFS有一定的正相關(guān)性。
　　結(jié)論:
　　該研究闡明了腸癌細(xì)胞對5-FU耐藥的機(jī)制，并發(fā)現(xiàn)穿心蓮內(nèi)酯在一定程度上可以恢復(fù)耐藥細(xì)胞對5-FU的敏感性，機(jī)制為穿心蓮內(nèi)酯直接靶向結(jié)合于BAX蛋白，并通過作用蛋白翻譯后途徑上調(diào)BAX的表達(dá)，最終促進(jìn)5-FU誘導(dǎo)的線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡?？傊?，該研究為臨