通絡(luò)益腎湯對高糖誘導(dǎo)大鼠腎小球系膜細(xì)胞ERS中CHOP、JNK表達(dá)的影響.pdf

1、目的:觀察通絡(luò)益腎湯對高糖培養(yǎng)下大鼠腎小球系膜細(xì)胞凋亡過程中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白CHOP、JNK基因mRNA表達(dá)的影響，探討其防治糖尿病腎病的可能機(jī)制。進(jìn)一步明確在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中不同時間點高濃度葡萄糖介導(dǎo)的腎細(xì)胞凋亡具體的途徑，為臨床靶向治療提供實驗依據(jù);從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激角度探索通絡(luò)益腎方調(diào)控細(xì)胞凋亡、發(fā)揮腎保護(hù)作用的CHOP、JNK通路的分子機(jī)制;最終為臨床通絡(luò)益腎法及方治療DN的廣泛應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法:研究對象為體外培養(yǎng)的大鼠腎

2、小球系膜細(xì)胞，培養(yǎng)的腎小球系膜細(xì)胞分為正常組、高糖培養(yǎng)組(病理組，糖濃度為30mmol/L)、高糖+通絡(luò)益腎湯大、中、小劑量組及高糖+洛丁新、糖適平組，用大鼠含藥血清給藥處理，分別給予相應(yīng)處理12h、24h、48h、72h后，采用四甲偶氮唑鹽(MTT)法檢測細(xì)胞增殖，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡，PT-PCR法檢測GRP78、CHOP、JNK蛋白mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:1.MTT結(jié)果:與正常組比較，模型組高糖刺激對腎小球系膜細(xì)胞

3、在12h、24h、48h和72 h均有明顯增殖效應(yīng)，差異顯著(p＜0.01)。與模型組比較，中藥組各組0D值在12h、24h、48和72 h均隨著給藥濃度的增加而依次降低，表明通絡(luò)益腎湯可成劑量依懶性抑制高糖誘導(dǎo)腎小球系膜細(xì)胞增殖，其中中藥大劑量0D值最小，抑制效果最明顯;在12h、24h、48h和72 h中藥大、中、小組與西藥組比較比較，西藥組0D值略小，表明抑制作用更好（p＜0.05或p＜0.01）;在12h、24h、48h和72h

4、與中藥小劑量組比較，中藥大、中劑量組0D值低（p＜0.05或p＜0.01）;在12h、24h、48h和72 h，與中藥中劑量組相比，中藥大劑量組0D值低(p＜0.05或p＜0.01);2.流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡結(jié)果:相對正常組大鼠腎小球系膜細(xì)胞，模型組凋亡率在24h、48h和72 h時明顯上升（p＜0.05或p＜0.01），表明高糖在24 h以后有明顯促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用;相對模型組，各給藥組細(xì)胞凋亡率均小于模型組（p＜0.05或p＜0.

5、01）;各中藥組24h、48h和72 h隨著中藥劑量的增加凋亡率均依次降低（p＜0.05或p＜0.01）;與西藥組相比中藥小劑量組在48h凋亡率高(p＜0.05)，但在72 h時凋亡率低于西藥組(p＜0.05);與西藥組相比中藥中劑量組在48h、72h凋亡率低于西藥組(p＜0.05);與西藥組相比中藥中劑量組在24h、48h、72h凋亡率低于西藥組(p＜0.05)表明與西藥組相比，中藥組在后期更能明顯降低細(xì)胞凋亡率;3.各組細(xì)胞GRP7

6、8mRNA表達(dá)情況:與正常組比較，模型組系膜細(xì)胞GRP78mRNA相對表達(dá)量在24 h、48h、72 h時明顯增加(p＜0.01或p＜0.05)。相對于模型組，各給藥組GRP78相對表達(dá)量在12h、24 h時無差異(p＞0.05)，48h、72 h時明顯減低(p＜0.01)。各中藥組在48h、72 h時隨著中藥劑量的增加，GRP78mRNA的相對表達(dá)量依次降低(p＜0.05或p＜0.01);在48h、72h與西藥組比較，各中藥組GRP7

7、8mRNA相對表達(dá)量較低(p＜0.05或p＜0.01);4.各組細(xì)胞JNKmRNA表達(dá)情況:與正常組比較，模型組系膜細(xì)胞JNKmRNA相對表達(dá)量在12h、24 h無差異(p＞0.05)，48h、72 h時明顯增加(p＜0.01)。與模型組比較，各給藥組JNKmRNA相對表達(dá)量在12h、24 h時無差異(p＞0.05)，48h、72 h時明顯減低(p＜0.05或p＜0.01)。各中藥組在48h、72 h時隨著中藥劑量的增加JNKmRNA的

8、相對表達(dá)量依次降低(p＜0.05或p＜0.0l)，其中中藥大、中劑量組與模型組比較有顯著性差異(p＜0.01);與西藥組相比，中藥大、中劑量組JNKmRNA相對表達(dá)量小(p＜0.05);5.各組細(xì)胞CHOPmRNA表達(dá)情況:與正常組比較，模型組系膜細(xì)胞CHOPmRNA相對表達(dá)量在12h、24 h無差異(p＞0.05)，48h、72 h時明顯增加(p＜0.01)。與模型組比較，各給藥組CHOPmRNA相對表達(dá)量在12h、24 h時無差異(

9、p＞0.05)，48h、72 h時明顯減低(p＜0.01或p＞0.05)。各中藥組在48h、72 h時隨著中藥劑量的增加CHOPmRNA的相對表達(dá)量依次降低(p＜0.01或p＞0.05);在48h、72h與西藥組比較，中藥大、中劑量組CHOPmRNA相對表達(dá)量低(p＜0.01或p＞0.05)。
　　結(jié)論:1.本實驗驗證了高糖環(huán)境下隨著作用時間的延長腎小球系膜細(xì)胞增殖逐漸減弱和凋亡顯著增加，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生在48h時，并呈持續(xù)性。西藥