參麥注射液關(guān)節(jié)腔注射治療膝骨關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)和臨床研究.pdf

1、目的:
　　膝骨關(guān)節(jié)炎(Knee osteoarthritis簡(jiǎn)稱(chēng)KOA)又名膝退行性骨關(guān)節(jié)病、老年性膝關(guān)節(jié)炎、肥大性膝關(guān)節(jié)炎，是臨床常見(jiàn)的一種骨關(guān)節(jié)病。其特征是以膝關(guān)節(jié)軟骨面發(fā)生原發(fā)性或繼發(fā)性退變及結(jié)構(gòu)紊亂，伴隨軟骨下骨質(zhì)增生、硬化、軟骨剝脫，繼而使膝關(guān)節(jié)逐漸破壞、畸形，最終出現(xiàn)膝關(guān)節(jié)功能障礙的一種退行性骨關(guān)節(jié)疾病。KOA是多數(shù)病人軟骨、肌肉、韌帶等不同組織病變綜合作用的結(jié)果。本課題探討參麥注射液關(guān)節(jié)腔注射對(duì)兔膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎模型

2、軟骨退變的保護(hù)機(jī)制以及觀察其治療膝骨關(guān)節(jié)炎的臨床療效，為臨床應(yīng)用參麥注射液防治骨關(guān)節(jié)炎提供研究依據(jù)，也為以后進(jìn)一步的研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法:
　　實(shí)驗(yàn)研究:40只SPF級(jí)新西蘭大白兔，隨機(jī)分成4組，每組10只，分別為正常組、模型組、參麥干預(yù)組（簡(jiǎn)稱(chēng)參麥組）和玻璃酸鈉干預(yù)組（簡(jiǎn)稱(chēng)玻璃酸鈉組）。模型組、參麥組和玻璃酸鈉組采用無(wú)菌條件下切除新西蘭兔右膝前交叉韌帶和內(nèi)側(cè)半月板造模（改良Hulth法）。術(shù)后連續(xù)5天術(shù)兔肌肉注射青霉素

3、50萬(wàn)單位預(yù)防感染。術(shù)后一周后參麥組和玻璃酸鈉組予相應(yīng)的藥物進(jìn)行膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射治療;模型組予生理鹽水行膝關(guān)節(jié)腔注射，每周一次，所有動(dòng)物每天驅(qū)趕30分鐘。藥物治療5周后，用空氣栓塞法處死動(dòng)物。再分別用組織學(xué)、RT-PCR和生物化學(xué)等技術(shù)對(duì)兔KOA模型關(guān)節(jié)軟骨、關(guān)節(jié)液和關(guān)節(jié)滑膜等部位進(jìn)行檢測(cè)和評(píng)估。本實(shí)驗(yàn)研究部分分四個(gè)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行:
　　(1)切開(kāi)實(shí)驗(yàn)側(cè)兔膝關(guān)節(jié)，用肉眼觀察兔股骨關(guān)節(jié)面大體結(jié)構(gòu)的病理變化;切取適量關(guān)節(jié)軟骨制作成普通光學(xué)顯微

4、鏡切片和透射電子顯微鏡切片，觀察關(guān)節(jié)軟骨超微病理變化。并按照Mankin關(guān)節(jié)軟骨組織學(xué)評(píng)分系統(tǒng)對(duì)光鏡下軟骨組織的病理變化進(jìn)行半定量評(píng)分，并比較各組間的差異;
　　(2)在切開(kāi)膝關(guān)節(jié)之前抽取關(guān)節(jié)液，檢測(cè)關(guān)節(jié)液中NO、IL-1β的含量;觀察比較各組關(guān)節(jié)滑膜的炎癥表現(xiàn)及程度;
　　(3)取兔關(guān)節(jié)軟骨，用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)藥物干預(yù)治療對(duì)兔KOA動(dòng)物模型中關(guān)節(jié)軟骨MMP-3，MMP-13，TIMP-1mRNA表達(dá)的影響;
　　

5、(4)切取適量的兔股骨髁負(fù)重關(guān)節(jié)面軟骨組織，用免疫組化法分別測(cè)量GAG含量和Ⅱ型膠原陽(yáng)性染色面積，并比較各組間的差異。
　　臨床研究:選取2015年1月-2016年1月我院骨科門(mén)診以及住院治療的以膝骨關(guān)節(jié)炎患者為研究對(duì)象。符合西醫(yī)診斷為單側(cè)“膝骨關(guān)節(jié)炎患者”且中醫(yī)診斷為“膝痹”屬“肝腎虧虛”的患者90例。采用隨機(jī)數(shù)字法將90例患者隨機(jī)分為2組，為參麥注射組和玻璃酸鈉注射對(duì)照組，每組45例。治療前后采用WOMAC評(píng)分評(píng)價(jià)治療療效。正

6、態(tài)分布的計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，采用配對(duì)t檢驗(yàn)分析膝關(guān)節(jié)炎患者使用參麥注射液以及玻璃酸鈉對(duì)照組癥狀治療前后改善之后的差異，P＜0.05認(rèn)為兩組數(shù)據(jù)的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。非正態(tài)分布的計(jì)量資料用中位數(shù)和四分位數(shù)表示，采用Wilcoxon法統(tǒng)計(jì)。組間比較用K-W檢驗(yàn)判斷其組間差異性，P＜0.05則有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明組間存在差異，使用Dunnett T3法進(jìn)行多重比較，了解參麥注射液和玻璃酸鈉組之間治療效果的差異。
　　

7、結(jié)果:
　　(1)肉眼觀正常組兔關(guān)節(jié)軟骨表面光滑，有彈性，淺藍(lán)色，半透明，無(wú)裂紋、缺損及軟化。模型組關(guān)節(jié)軟骨表面大多呈黃色，斑片狀或廣泛性粗糙、糜爛，甚至出現(xiàn)裂紋、缺損及軟化，失去彈性。參麥組和玻璃酸鈉組關(guān)節(jié)軟骨的病理變化肉眼觀基本相同，表面大多呈黃色，斑片狀或廣泛性略顯粗糙，未見(jiàn)明顯裂紋或缺損。光鏡、電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，參麥組和玻璃酸鈉組動(dòng)物關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、排列等無(wú)明顯差異性。
　　(2)參麥組、玻璃酸鈉組關(guān)節(jié)液中NO

8、、IL-1β含量與模型組相比明顯降低，有顯著性差異(P＜0.01)。參麥治療組關(guān)節(jié)液中NO、IL-1β含量與玻璃酸鈉治療組比明顯降低，有顯著性差異(P＜0.01)。
　　(3)正常組關(guān)節(jié)軟骨中，MMP-3，MMP-13的mRNA表達(dá)較低、而TIMP-1的表達(dá)較高;模型組關(guān)節(jié)軟骨中MMP-3，MMP-13的mRNA表達(dá)明顯增高，而TIMP-1表達(dá)明顯降低。正常組與模型組比較，差異有顯著性意義(P＜0.05)。各治療組表達(dá)值比模型組顯

9、著降低(P＜0.05)。參麥治療組與玻璃酸鈉組相比有顯著性差異(P＜0.05)。
　　(4)各組GAG含量統(tǒng)計(jì)結(jié)果:①模型組與玻璃酸鈉組比較，軟骨基質(zhì)中GAG含量無(wú)顯著性差異(P＞0.05);②參麥組與玻璃酸鈉組、模型組分別比較，參麥組軟骨基質(zhì)中GAG含量有顯著性差異(P＜0.01);Ⅱ型膠原陽(yáng)性染色面積統(tǒng)計(jì)結(jié)果:①模型組與玻璃酸鈉組比較，陽(yáng)性染色面積比無(wú)顯著性差異(P＞0.05);②參麥組與玻璃酸鈉組、模型組分布比較，參麥組陽(yáng)性

10、染色面積有顯著性差異(P＜0.01)。
　　(5)治療前后疼痛比較:治療一個(gè)療程后，參麥治療組以及玻璃酸鈉對(duì)照治療組患者膝關(guān)節(jié)疼痛有改善與好轉(zhuǎn)，與治療前相比較，組內(nèi)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(K-W檢驗(yàn)，P=0.001);參麥組治療后與玻璃酸鈉組相比，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（采用Dunnett T3多重比較，P=0.014）;
　　(6)治療前后僵硬比較:治療一個(gè)療程后，參麥組和玻璃酸鈉組患者膝關(guān)節(jié)僵硬評(píng)分均有改善與好轉(zhuǎn)。與治療前相比較，

11、組內(nèi)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(K-W檢驗(yàn)，P=0.000);參麥組治療后與玻璃酸鈉組相比，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(采用Dunnett T3多重比較，P=0.018)。
　　(7)治療前后日?；顒?dòng)度比較:治療一療程后，參麥組以及玻璃酸鈉對(duì)照組患者膝關(guān)節(jié)日?；顒?dòng)度評(píng)分均有改善與好轉(zhuǎn)。與治療前相比較，兩組總體方差齊(F=0.171，P=0.843);經(jīng)方差分析(F=0.075，P=0.928)，結(jié)果提示在α=0.05的檢驗(yàn)水準(zhǔn)下治療后兩組在日?；顒?dòng)

12、分值上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　(8)治療前后WOMAC評(píng)分總分比較:治療一個(gè)療程后，參麥組以及玻璃酸鈉對(duì)照組患者膝關(guān)節(jié)日?；顒?dòng)度評(píng)分均有改善與好轉(zhuǎn)。治療前兩組相比較，組內(nèi)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=0.524，P=0.594);參麥組與玻璃酸鈉對(duì)照組治療前后評(píng)分比較，其差異有顯著意義（數(shù)據(jù)正態(tài)分布，配對(duì)T檢驗(yàn)P=0.001）。
　　結(jié)論:
　　(1)參麥注射液可以明顯減少KOA動(dòng)物模型關(guān)節(jié)液中NO、IL-1β含量，抑制炎癥的

13、效果明顯;
　　(2)參麥注射液關(guān)節(jié)腔注射治療KOA動(dòng)物模型，能抑制MMPs表達(dá)，增加TIMP-1表達(dá)，抑制關(guān)節(jié)軟骨膠原的降解，從而延緩關(guān)節(jié)軟骨退變;
　　(3)參麥注射液關(guān)節(jié)腔注射治療KOA動(dòng)物模型，能提高ECM中GAG含量，促進(jìn)型Ⅱ膠原的合成;
　　(4)參麥注射液可促進(jìn)KOA動(dòng)物模型關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞外基質(zhì)合成，對(duì)新合成的基質(zhì)降解有顯著抑制作用。
　　(5)本研究證實(shí)，參麥注射液治療膝骨關(guān)節(jié)炎在緩解疼痛、改善關(guān)節(jié)