參麥注射液關(guān)節(jié)腔注射治療膝骨關(guān)節(jié)炎的實驗和臨床研究.pdf

1、目的:
　　膝骨關(guān)節(jié)炎(Knee osteoarthritis簡稱KOA)又名膝退行性骨關(guān)節(jié)病、老年性膝關(guān)節(jié)炎、肥大性膝關(guān)節(jié)炎，是臨床常見的一種骨關(guān)節(jié)病。其特征是以膝關(guān)節(jié)軟骨面發(fā)生原發(fā)性或繼發(fā)性退變及結(jié)構(gòu)紊亂，伴隨軟骨下骨質(zhì)增生、硬化、軟骨剝脫，繼而使膝關(guān)節(jié)逐漸破壞、畸形，最終出現(xiàn)膝關(guān)節(jié)功能障礙的一種退行性骨關(guān)節(jié)疾病。KOA是多數(shù)病人軟骨、肌肉、韌帶等不同組織病變綜合作用的結(jié)果。本課題探討參麥注射液關(guān)節(jié)腔注射對兔膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎模型

2、軟骨退變的保護(hù)機(jī)制以及觀察其治療膝骨關(guān)節(jié)炎的臨床療效，為臨床應(yīng)用參麥注射液防治骨關(guān)節(jié)炎提供研究依據(jù)，也為以后進(jìn)一步的研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法:
　　實驗研究:40只SPF級新西蘭大白兔，隨機(jī)分成4組，每組10只，分別為正常組、模型組、參麥干預(yù)組（簡稱參麥組）和玻璃酸鈉干預(yù)組（簡稱玻璃酸鈉組）。模型組、參麥組和玻璃酸鈉組采用無菌條件下切除新西蘭兔右膝前交叉韌帶和內(nèi)側(cè)半月板造模（改良Hulth法）。術(shù)后連續(xù)5天術(shù)兔肌肉注射青霉素

3、50萬單位預(yù)防感染。術(shù)后一周后參麥組和玻璃酸鈉組予相應(yīng)的藥物進(jìn)行膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射治療;模型組予生理鹽水行膝關(guān)節(jié)腔注射，每周一次，所有動物每天驅(qū)趕30分鐘。藥物治療5周后，用空氣栓塞法處死動物。再分別用組織學(xué)、RT-PCR和生物化學(xué)等技術(shù)對兔KOA模型關(guān)節(jié)軟骨、關(guān)節(jié)液和關(guān)節(jié)滑膜等部位進(jìn)行檢測和評估。本實驗研究部分分四個實驗進(jìn)行:
　　(1)切開實驗側(cè)兔膝關(guān)節(jié)，用肉眼觀察兔股骨關(guān)節(jié)面大體結(jié)構(gòu)的病理變化;切取適量關(guān)節(jié)軟骨制作成普通光學(xué)顯微

4、鏡切片和透射電子顯微鏡切片，觀察關(guān)節(jié)軟骨超微病理變化。并按照Mankin關(guān)節(jié)軟骨組織學(xué)評分系統(tǒng)對光鏡下軟骨組織的病理變化進(jìn)行半定量評分，并比較各組間的差異;
　　(2)在切開膝關(guān)節(jié)之前抽取關(guān)節(jié)液，檢測關(guān)節(jié)液中NO、IL-1β的含量;觀察比較各組關(guān)節(jié)滑膜的炎癥表現(xiàn)及程度;
　　(3)取兔關(guān)節(jié)軟骨，用RT-PCR技術(shù)檢測藥物干預(yù)治療對兔KOA動物模型中關(guān)節(jié)軟骨MMP-3，MMP-13，TIMP-1mRNA表達(dá)的影響;
　　

5、(4)切取適量的兔股骨髁負(fù)重關(guān)節(jié)面軟骨組織，用免疫組化法分別測量GAG含量和Ⅱ型膠原陽性染色面積，并比較各組間的差異。
　　臨床研究:選取2015年1月-2016年1月我院骨科門診以及住院治療的以膝骨關(guān)節(jié)炎患者為研究對象。符合西醫(yī)診斷為單側(cè)“膝骨關(guān)節(jié)炎患者”且中醫(yī)診斷為“膝痹”屬“肝腎虧虛”的患者90例。采用隨機(jī)數(shù)字法將90例患者隨機(jī)分為2組，為參麥注射組和玻璃酸鈉注射對照組，每組45例。治療前后采用WOMAC評分評價治療療效。正

6、態(tài)分布的計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，采用配對t檢驗分析膝關(guān)節(jié)炎患者使用參麥注射液以及玻璃酸鈉對照組癥狀治療前后改善之后的差異，P＜0.05認(rèn)為兩組數(shù)據(jù)的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。非正態(tài)分布的計量資料用中位數(shù)和四分位數(shù)表示，采用Wilcoxon法統(tǒng)計。組間比較用K-W檢驗判斷其組間差異性，P＜0.05則有統(tǒng)計學(xué)意義。說明組間存在差異，使用Dunnett T3法進(jìn)行多重比較，了解參麥注射液和玻璃酸鈉組之間治療效果的差異。
　　

7、結(jié)果:
　　(1)肉眼觀正常組兔關(guān)節(jié)軟骨表面光滑，有彈性，淺藍(lán)色，半透明，無裂紋、缺損及軟化。模型組關(guān)節(jié)軟骨表面大多呈黃色，斑片狀或廣泛性粗糙、糜爛，甚至出現(xiàn)裂紋、缺損及軟化，失去彈性。參麥組和玻璃酸鈉組關(guān)節(jié)軟骨的病理變化肉眼觀基本相同，表面大多呈黃色，斑片狀或廣泛性略顯粗糙，未見明顯裂紋或缺損。光鏡、電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，參麥組和玻璃酸鈉組動物關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、排列等無明顯差異性。
　　(2)參麥組、玻璃酸鈉組關(guān)節(jié)液中NO

8、、IL-1β含量與模型組相比明顯降低，有顯著性差異(P＜0.01)。參麥治療組關(guān)節(jié)液中NO、IL-1β含量與玻璃酸鈉治療組比明顯降低，有顯著性差異(P＜0.01)。
　　(3)正常組關(guān)節(jié)軟骨中，MMP-3，MMP-13的mRNA表達(dá)較低、而TIMP-1的表達(dá)較高;模型組關(guān)節(jié)軟骨中MMP-3，MMP-13的mRNA表達(dá)明顯增高，而TIMP-1表達(dá)明顯降低。正常組與模型組比較，差異有顯著性意義(P＜0.05)。各治療組表達(dá)值比模型組顯

9、著降低(P＜0.05)。參麥治療組與玻璃酸鈉組相比有顯著性差異(P＜0.05)。
　　(4)各組GAG含量統(tǒng)計結(jié)果:①模型組與玻璃酸鈉組比較，軟骨基質(zhì)中GAG含量無顯著性差異(P＞0.05);②參麥組與玻璃酸鈉組、模型組分別比較，參麥組軟骨基質(zhì)中GAG含量有顯著性差異(P＜0.01);Ⅱ型膠原陽性染色面積統(tǒng)計結(jié)果:①模型組與玻璃酸鈉組比較，陽性染色面積比無顯著性差異(P＞0.05);②參麥組與玻璃酸鈉組、模型組分布比較，參麥組陽性

10、染色面積有顯著性差異(P＜0.01)。
　　(5)治療前后疼痛比較:治療一個療程后，參麥治療組以及玻璃酸鈉對照治療組患者膝關(guān)節(jié)疼痛有改善與好轉(zhuǎn)，與治療前相比較，組內(nèi)差異有統(tǒng)計學(xué)差異(K-W檢驗，P=0.001);參麥組治療后與玻璃酸鈉組相比，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義（采用Dunnett T3多重比較，P=0.014）;
　　(6)治療前后僵硬比較:治療一個療程后，參麥組和玻璃酸鈉組患者膝關(guān)節(jié)僵硬評分均有改善與好轉(zhuǎn)。與治療前相比較，

11、組內(nèi)差異有統(tǒng)計學(xué)差異(K-W檢驗，P=0.000);參麥組治療后與玻璃酸鈉組相比，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(采用Dunnett T3多重比較，P=0.018)。
　　(7)治療前后日?；顒佣缺容^:治療一療程后，參麥組以及玻璃酸鈉對照組患者膝關(guān)節(jié)日?；顒佣仍u分均有改善與好轉(zhuǎn)。與治療前相比較，兩組總體方差齊(F=0.171，P=0.843);經(jīng)方差分析(F=0.075，P=0.928)，結(jié)果提示在α=0.05的檢驗水準(zhǔn)下治療后兩組在日?；顒?/p>

12、分值上差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　(8)治療前后WOMAC評分總分比較:治療一個療程后，參麥組以及玻璃酸鈉對照組患者膝關(guān)節(jié)日?；顒佣仍u分均有改善與好轉(zhuǎn)。治療前兩組相比較，組內(nèi)差異無統(tǒng)計學(xué)差異(F=0.524，P=0.594);參麥組與玻璃酸鈉對照組治療前后評分比較，其差異有顯著意義（數(shù)據(jù)正態(tài)分布，配對T檢驗P=0.001）。
　　結(jié)論:
　　(1)參麥注射液可以明顯減少KOA動物模型關(guān)節(jié)液中NO、IL-1β含量，抑制炎癥的

13、效果明顯;
　　(2)參麥注射液關(guān)節(jié)腔注射治療KOA動物模型，能抑制MMPs表達(dá)，增加TIMP-1表達(dá)，抑制關(guān)節(jié)軟骨膠原的降解，從而延緩關(guān)節(jié)軟骨退變;
　　(3)參麥注射液關(guān)節(jié)腔注射治療KOA動物模型，能提高ECM中GAG含量，促進(jìn)型Ⅱ膠原的合成;
　　(4)參麥注射液可促進(jìn)KOA動物模型關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞外基質(zhì)合成，對新合成的基質(zhì)降解有顯著抑制作用。
　　(5)本研究證實，參麥注射液治療膝骨關(guān)節(jié)炎在緩解疼痛、改善關(guān)節(jié)