關(guān)節(jié)腔注射低分子肝素與玻璃酸鈉復(fù)方凝膠注射液治療骨關(guān)節(jié)炎的研究.pdf

1、骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis，OA)是一組有不同病因但有相似生物學(xué)、形態(tài)學(xué)和臨床表現(xiàn)的疾病，其發(fā)病機(jī)制尚不明確，是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程，系多因素相互作用的結(jié)果，與年齡、肥胖、炎癥、遺傳、內(nèi)分泌異常、氣候等因素有關(guān)。隨著社會(huì)人口老齡化的加快，OA的危害越來(lái)越大。我國(guó)約有6000萬(wàn)～7000萬(wàn)人患有不同程度的OA。 低分子肝素(low molecular weight heparin，LMWH)是糖胺聚糖(glycosami

2、noglycan，GAG)中結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜的一種。最新研究表明，LMWH不僅具有抗凝、抗血栓、調(diào)血脂等多種生物活性，同時(shí)還有改善局部血液循環(huán)，加速創(chuàng)面愈合，促進(jìn)結(jié)締組織修復(fù)、抗炎、消腫、抗過(guò)敏等功效。 玻璃酸鈉(sodium hyaluronate，SH)是關(guān)節(jié)滑液及軟骨的重要組成成分，廣泛存在于軟骨多形細(xì)胞、滑膜細(xì)胞中，對(duì)關(guān)節(jié)、軟骨起潤(rùn)滑、緩沖和屏障作用，組成和修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨。關(guān)節(jié)腔注射SH已成為OA的主要治療方法，其能夠增加關(guān)節(jié)

3、滑液的黏彈性和潤(rùn)滑性，較好的改善OA，恢復(fù)滑膜和軟骨基質(zhì)的黏彈性，緩解炎癥等。 本課題研究了LMWH與SH(LMWH-SH)復(fù)方凝膠注射液、LMWH注射液及其對(duì)OA動(dòng)物模型的治療作用和機(jī)制。研究中取得了以下幾方面的成果。 1制備了LMWH-SH、LMWH注射液研究制備了一定濃度的LMWH-SH復(fù)方凝膠注射液和LMWH注射液。建立了LMWH-SH復(fù)方凝膠注射液的主要質(zhì)量控制指標(biāo)，并進(jìn)行了穩(wěn)定性考察，表明該復(fù)方凝膠注射液具有

4、良好的穩(wěn)定性。 2考察了LMWH-SH、LMWH注射液對(duì)OA動(dòng)物模型的治療作用建立了木瓜酶誘導(dǎo)的兔膝OA動(dòng)物模型，以不同濃度的LMWH-SH、LMWH注射液進(jìn)行兔膝關(guān)節(jié)腔注射，以生理鹽水(normal saline，NS)和SH注射液為對(duì)照，給藥5周，取關(guān)節(jié)軟骨進(jìn)行光鏡觀察，觀察關(guān)節(jié)軟骨和滑膜變化情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，LMWH-SH各復(fù)方制劑均能顯著減輕兔膝OA癥狀。 3進(jìn)行了LMWH-SH復(fù)方凝膠注射液的劑量篩選實(shí)驗(yàn)根據(jù)動(dòng)物

5、預(yù)試實(shí)驗(yàn)結(jié)果，結(jié)合制劑的理化性質(zhì)，確定LMWH與SH的最佳配比。按照預(yù)試動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法，進(jìn)行劑量篩選實(shí)驗(yàn)。 4研究了LMWH-SH復(fù)方凝膠注射液對(duì)OA的作用機(jī)制通過(guò)堿水解、蛋白酶裂解、超速離心的方法提取分離經(jīng)：LMWH-SH等注射液治療的OA模型兔膝關(guān)節(jié)軟骨的GAG，用天青A(Azure A，AA)比色法檢測(cè)GAG總量，用放射免疫法測(cè)定其中玻璃酸(hyaluronic acid，HA)的含量，考察治療后關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)蛋白聚糖(pro

6、teoglycan，PG)的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)LMWH-SH復(fù)方凝膠注射液能夠明顯增加病變關(guān)節(jié)軟骨中PG的含量。 研究還檢測(cè)了治療后OA模型兔膝關(guān)節(jié)滑液中白介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白介素-6(interleukin-6，IL-6)的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)LMWH-SH復(fù)方凝膠注射液能夠顯著降低關(guān)節(jié)滑液中IL-1β、TNF-α的表達(dá)

7、水平。由于IL-6具有雙重作用，很難用其表達(dá)水平來(lái)考察OA的嚴(yán)重程度。綜合病理切片、細(xì)胞因子(cytokine，CK)水平的考察結(jié)果，LMWH-SH復(fù)方凝膠注射液的治療效果較好。 根據(jù)研究結(jié)果推測(cè)，復(fù)方凝膠注射液組中低LMWH-SH組治療效果更佳。 研究中取得的主要研究成果和結(jié)論： (1)研究探討了LMWH-SH、LMWH注射液的制備工藝和生產(chǎn)條件。 (2)研究了質(zhì)量可控，具有良好穩(wěn)定性的LMWH-SH復(fù)

8、方凝膠注射液． (3)LMWH-SH注射液的流變學(xué)性質(zhì)與文獻(xiàn)報(bào)道的正常關(guān)節(jié)滑液的流變學(xué)性質(zhì)類似，因此可以作為人工滑液。 (4)考察了不同濃度木瓜酶誘導(dǎo)的兔OA模型的嚴(yán)重程度和適用性。 (5)用木瓜酶誘導(dǎo)的兔OA模型考察3種不同配比的LMWH-SH復(fù)方凝膠注射液對(duì)OA的療效，研究證實(shí)LMWH-SH復(fù)方凝膠注射液能夠保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨，顯著改善兔膝OA，減輕炎癥反應(yīng)。 (6)從免疫分子水平探討了LMWH-SH復(fù)方凝