CD40siRNA對EAM大鼠外周血Il-22、Il-6及TNF-α表達的影響.pdf

1、背景:病毒性心肌炎(viral myocarditis，VMC)是指病毒感染引起心肌細胞變性、壞死，間質(zhì)中炎性細胞浸潤及纖維滲出的疾病，是引起青少年突然死亡的重要原因，心內(nèi)膜心肌活組織檢查是確診的金標(biāo)準(zhǔn)。目前心肌炎的發(fā)病機制尚未完全闡明，但有確鑿證據(jù)表明，病毒感染后，心臟抗原表位暴露引起的自身免疫反應(yīng)，是心肌炎重要的發(fā)病機制，其中T細胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)發(fā)揮重要作用。實驗性自身免疫性心肌炎(experimental autoimmune m

2、yocarditis，EAM)大鼠是目前研究心肌炎自身免疫反應(yīng)機制公認(rèn)的動物模型。白細胞介素-22(interleukin22，IL-22)主要由新近發(fā)現(xiàn)的CD4+T細胞亞型Th22細胞分泌。IL-22根據(jù)其參與免疫反應(yīng)的途徑不同，發(fā)揮促炎或抗炎作用。IL-22可作為促炎性細胞因子，增加滑膜成纖維細胞中單核細胞趨化蛋白的表達，促進結(jié)腸上皮下成纖維細胞外周炎性因子和趨化因子的聚集。在心肌組織，IL-22可下調(diào)EAM大鼠免疫細胞mRNA和蛋

3、白的表達，減輕心肌組織炎癥，發(fā)揮抗炎作用。IL-22在VMC小鼠中明顯升高，應(yīng)用Anti-IL-22 Ab治療VMC小鼠可降低IL-22的表達、增加心肌組織中炎性細胞的浸潤。Hanawa等將IL-22-Ig融合基因作用于EAM大鼠，可上調(diào)IL-22的表達，減輕EAM大鼠心肌炎癥。RNA干擾(RNA interference，RNAi)技術(shù)通過siRNA(small interfering RNA，siRNA)參與真核細胞抵抗感染的防御機

4、制，在轉(zhuǎn)錄水平，調(diào)節(jié)任何目的基因的表達。前期應(yīng)用CD40小分子干擾RNA(CD40siRNA)下調(diào)EAM大鼠CD40基因的表達，阻斷CD40/CD40L共刺激通道，證實CD40siRNA可減輕EAM大鼠心肌炎癥，但其具體作用機制尚未完全闡明。
　　目的:探討IL-22在EAM大鼠中的變化規(guī)律及CD40siRNA對EAM大鼠外周血IL-22、IL-6及TNF-α表達的影響及其臨床意義。
　　方法:將48只6-8周雄性Lewis

5、大鼠隨機分為正常對照組、EAM組、CD40siRNA組及siRNA組。免疫第0天與第7天，對正常對照組大鼠雙后肢足墊區(qū)注射PBS緩沖液0.2ml，對EAM組、CD40siRNA組和siRNA組大鼠雙后肢足墊區(qū)注射已混勻的豬心肌球蛋白與完全弗氏佐劑的混懸液0.2ml。免疫第7天，對CD40siRNA組、siRNA組大鼠尾靜脈分別注射CD40siRNA慢病毒表達載與siRNA慢病毒表達載體0.2ml，病毒量為5×107TU。在免疫第21天，

6、每組處死6只大鼠，免疫第56天，處死剩余全部大鼠，光鏡與電鏡下觀察各組大鼠心肌組織病理及超微結(jié)構(gòu)的改變，計算心肌組織病理積分，酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清cTnT、BNP、IL-22、IL-6及TNF-α的濃度。
　　結(jié)果:1.EAM組、CD40siRNA組和siRNA組大鼠心肌炎發(fā)病率均為100％，至免疫第56天，CD40siRNA組和正常對照組大鼠無死亡，EAM組與siRNA組大鼠分別死亡2只，各組大鼠死亡率無統(tǒng)計學(xué)

7、差異（P＞0.05）。
　　2.在急性期與慢性期，CD40siRNA組大鼠心肌組織病理積分均較EAM組顯著減低（P均＜0.05），siRNA組與EAM組無統(tǒng)計學(xué)差異（P均＞0.05）。CD40siRNA組慢性期心肌組織病理積分較急性期明顯降低(P＜0.05），EAM組急性期與慢性期無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。
　　3.在急性期與慢性期，CD40siRNA組大鼠外周血cTnT和BNP的水平均較EAM組明顯降低(P均＜0.05

8、），siRNA組與EAM組無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。CD40siRNA組和EAM組大鼠慢性期cTnT和BNP的水平均較急性期顯著降低（P均＜0.05）。EAM組大鼠外周血cTnT和BNP的水平與心肌組織病理積分之間均存在顯著的正相關(guān)關(guān)系(r=0.732，r=0.869，P均＜0.05)。
　　4.在急性期與慢性期，CD40siRNA組、EAM組及siRNA組大鼠外周血IL-22的水平均較正常對照組顯著升高（P均＜0.05），C

9、D40siRNA組均明顯高于EAM組（P均＜0.05），siRNA組與EAM組無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。CD40siRNA組和EAM組大鼠慢性期IL-22的水平均較急性期顯著升高（P均＜0.05）。
　　5.在急性期與慢性期，CD40siRNA組、EAM組及siRNA組大鼠外周血IL-6和TNF-α的水平均較正常對照組明顯升高（P均＜0.05），CD40siRNA組IL-6和TNF-α的水平均明顯低于EAM組（P均＜0.05）

10、，siRNA組與EAM組無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。CD40siRNA組和EAM組大鼠慢性期IL-6、TNF-α的水平均較急性期顯著降低（P均＜0.05）。
　　6.EAM組大鼠外周血IL-22的水平與心肌組織病理積分、cTnT及BNP之間不存在相關(guān)關(guān)系(r=0.104，r=-0.507，r=-0.039，P均＞0.05)，IL-6、TNF-α的水平與心肌組織病理積分、cTnT及BNP之間均呈正相關(guān)關(guān)系(IL-6:r=0.764

11、，r=0.962，r=0.810; TNF-α: r=0.697, r=0.946, r=0.750,P均＜0.05)。
　　結(jié)論:1.CD40siRNA能顯著減輕EAM大鼠心肌炎癥，降低心肌損傷程度，改善心功能，對EAM大鼠有治療作用。
　　2.EAM組大鼠外周血IL-22的表達明顯升高，其慢性期水平顯著高于急性期。
　　3.EAM組大鼠外周血IL-6與TNF-α的表達均明顯升高，且其水平與心肌組織病理積分、cTnT