基于微流控分析系統(tǒng)的單細胞進樣、溶膜、分離和活性氧檢測的研究.pdf

1、過氧化氫(H2O2)在細胞信號轉(zhuǎn)導過程中充當著第二信使的角色，其在生物體的生理、病理、器官退化等過程中起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。另外，H2O2與其他的活性氧自由基如超氧陰離子(O2-。)和羥基自由基(·OH)具有很密切的關(guān)系。因此在單細胞水平上對H2O2進行檢測對于重大疾病的早期診斷、治療、藥物篩選和細胞生理、病理過程的研究有重要的指導意義。
　　本論文主要是以實驗室自行搭建的微流控芯片單細胞活性氧自動分析儀和高靈敏度激光誘導熒光檢測器

2、為基礎(chǔ)，利用實驗室內(nèi)部設(shè)計合成的新型綠色熒光探針二(對甲苯磺?；?-二氯熒光素(FS)，采用電動門式進樣法自動化實現(xiàn)了單細胞進樣、單細胞溶膜、高效電泳分離和胞內(nèi)H2O2的定量檢測。本論文主要含有兩部分，內(nèi)容如下:
　　第一章是引言，主要是對多年來單細胞組分分析所涉及到的操作單元，包括單細胞操縱手段、衍生方法、溶膜手段和檢測手段進行了概述，然后對微流控芯片在單細胞組分分析中的應用進行了詳細的綜述，并闡述了近年來興起的高通量單細胞分析

3、技術(shù)。
　　第二章建立了基于電動門式進樣方法的微流控系統(tǒng)首次實現(xiàn)了單個肝癌HepG2細胞內(nèi)H2O2的定量檢測。將經(jīng)熒光探針FS孵育過的細胞引入微流控芯片樣品池，利用電動門式進樣和激光誘導熒光檢測器在簡單十字芯片上自動化實現(xiàn)了單細胞進樣(細胞采樣和單細胞捕獲)、溶膜、電泳分離和單細胞內(nèi)H2O2的定量檢測。該方法主要包含三個時段:第一時段(細胞采樣階段)，樣品池中的細胞在電場力的驅(qū)動作用下流經(jīng)十字交叉口后流向樣品廢液池；第二時段(單細

4、胞裝載階段)，改變電壓條件會有單個細胞被捕獲進入分離通道；第三時段(細胞溶膜和電泳分離階段)，被捕獲的單個細胞在高壓電場的作用下發(fā)生快速溶膜和電泳分離，并由激光誘導熒光檢測器所檢測，而樣品池中的其他細胞在電場力的驅(qū)動作用下仍然流經(jīng)十字交叉口后流向樣品廢液池，而不會對分離分析造成干擾。經(jīng)該方法檢測到的單個肝癌HepG2細胞內(nèi)H2O2的平均含量為16.09±9.84 amol(n=15)。該方法具有簡單、快速、易于實現(xiàn)、自動化和集成化程度高