海洋小鏈霉菌DY2741菌株抗菌活性物質(zhì)的初步研究.pdf

1、獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名：復(fù)乏經(jīng)時間：勵年／月／擁關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)

2、校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。(保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議)研究生簽名：縊縫時間：2∥礦年多月／2，日第一導(dǎo)師簽名：蔡蘞死時間：2a礦口年萬月，L同，爭。￥l辱“；，●■■■■■●●ll摘要對廈門周邊海域采集的不同樣品(包括海水、海沙、海貝等)，采用稀釋平板法分離、純化、保

3、藏各種海洋微生物，共分離到細(xì)菌57株，放線菌17株和霉菌128株。采用濾紙片法以金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、啤酒酵母、黑曲霉為測試菌，進(jìn)行抗菌活性菌種篩選，結(jié)果表明從海水和海貝分離出具有抗菌活性的細(xì)菌占該類樣品分離總細(xì)菌數(shù)比例較高，分別為692％和455％；從海水、海沙和海貝中分離出具有抗菌活性的放線菌占從該類樣品分離總放線菌數(shù)比率高，分別占75O％、80O％和800％：從海沙和海貝中分離出具有抗菌活性的真菌占從該類樣品分離總真菌數(shù)比率高

4、，分別為545％和571％。海洋細(xì)菌和放線菌抗兩種細(xì)菌比率高于其它類型測試菌，而海洋真菌對各測試菌的抗菌比率相對平均。二對一株分離自廈門大嶼島海域潮間帶海洋軟體動物的放線菌進(jìn)行研究。經(jīng)過形態(tài)特征、培養(yǎng)特征及生理生化特征可以初步鑒定為鏈霉菌屬(Streptomycessp)黃色類群(Flavus)，16SrDNA序列與GeneBank比對和系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建表明其與StreptomycesparvusstrainNRRLB1455T的序列同源

5、性達(dá)99％。為了提高抗菌物質(zhì)的產(chǎn)量，對菌株發(fā)酵培養(yǎng)基組分和發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化。采用管碟法測發(fā)酵液的活性，篩選出最適碳源為可溶性淀粉，最適氮源為氯化銨。通過響應(yīng)面設(shè)計BoxBehnken中心組合實(shí)驗(yàn)確定培養(yǎng)基最佳組成為可溶性淀粉2035％，氯化銨04425％、氯化鈉2000％；發(fā)酵條件優(yōu)化結(jié)果表明最適起始pH70，最適接種菌齡48h，最適接種量為6％，最適裝液量為250mL，最適三角瓶裝量70mL，最適培養(yǎng)溫度為28℃，最適培養(yǎng)時間5d。菌

6、株DY2741抗菌物質(zhì)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明：該抗菌物質(zhì)對pH、UV具有較好的穩(wěn)定性，高于100℃處理抗菌物質(zhì)部分失活。通過對該菌發(fā)酵液中抗菌物質(zhì)的溶解性質(zhì)測定，可推知該物質(zhì)極性中等。葡聚糖凝膠SephadexLH20柱色譜分離后，經(jīng)抗菌活性檢測發(fā)現(xiàn)兩個活性峰，其中第2個峰對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌活性較強(qiáng)。將第2個峰的洗脫液各組分進(jìn)行薄層色譜分析，選取斑點(diǎn)清晰且單一的組分進(jìn)行氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用分析，總離子流圖表明該組分成分單一，根據(jù)質(zhì)譜圖