真蘚科絲瓜蘚屬Pohlia和大葉蘚屬Rhodobryum系統(tǒng)位置的RAPD分析.pdf

1、真蘚科Bryaceae植物的分子系統(tǒng)學(xué)研究是蘚類植物研究中的新熱點(diǎn)，RAPD是分子系統(tǒng)學(xué)研究中被廣泛采用的一項(xiàng)重要技術(shù)。在真蘚科Bryaceae中，絲瓜蘚屬Pohlia的位置、大葉蘚屬Rhodobryum屬的地位和真蘚科Bryaceae內(nèi)幾個(gè)屬的系統(tǒng)排列關(guān)系一直存在爭(zhēng)議。為了對(duì)上述問(wèn)題進(jìn)行探討，本研究建立了真蘚科Bryaceae植物RAPD的反應(yīng)體系，構(gòu)建了真蘚科Bryaceae植物RAPD圖譜，并利用RAPD圖譜對(duì)真蘚科Bryacea

2、e植物進(jìn)行了系統(tǒng)發(fā)育分析。 通過(guò)比較DNA提取方法，本研究選擇快速提取試劑盒成功提取所有標(biāo)本基因組DNA，所提DNA完整性好，純度高，能夠滿足RAPD的要求。通過(guò)單因素和正交試驗(yàn)對(duì)影響RAPD的因素進(jìn)行考查，建立了優(yōu)化的RAPD反應(yīng)體系：dNTP為0.2mmol/L，隨機(jī)引物0.4μmol/L，Taq DNA聚合酶1.25U，Mg<'2+>為2mmol/L，模板DNA為50ng，擴(kuò)增體系為25μl。擴(kuò)增程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性7mi

3、n，然后94℃變性1min，36℃退火1min，72℃延伸2min，40個(gè)循環(huán)，72℃終延伸7min。以優(yōu)化出來(lái)的PCR條件和PCR體系以標(biāo)本Y1、Y2、Y3所提DNA為模板對(duì)250條引物進(jìn)行篩選擴(kuò)增，35條擴(kuò)增穩(wěn)定、富有多態(tài)性的引物被篩選出來(lái)。 采用上述35條引物對(duì)40份標(biāo)本所提DNA進(jìn)行擴(kuò)增，最終采用26條引物構(gòu)建RAPD圖譜，共擴(kuò)增出198條穩(wěn)定的條帶，分子量在200bp～5,000bp之間，平均擴(kuò)增條帶7.61條，其中1

4、81條為多態(tài)性條帶，占91.41％。表明該圖譜能夠反映出所研究類群的遺傳多態(tài)性，可以作為系統(tǒng)發(fā)育分析的依據(jù)。 采集RAPD多態(tài)性信息，運(yùn)用系統(tǒng)進(jìn)化分析軟件PAUP4.0b8分別采用MP法、NJ法、UPGMA法對(duì)多態(tài)性信息進(jìn)行分析，構(gòu)建了MP、NJ、UPGMA系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。所揭示的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系與傳統(tǒng)劃分并不一致，部分結(jié)果支持基于分子序列的研究結(jié)果。 系統(tǒng)發(fā)育分析的結(jié)果顯示：絲瓜蘚屬Pohlia更接近于提燈蘚科Mniaceae

5、而遠(yuǎn)離真蘚科Bryaceae的類群，支持Cox等分子序列證據(jù)將絲瓜蘚屬Pohlia放在提燈蘚科Mniaceae的安排；大葉蘚屬Rhodobryum與真蘚屬Bryum作為姊妹群存在，不支持Ochi將其作為真蘚屬Bryum內(nèi)一個(gè)亞屬的安排。真蘚科Bryaceae和真蘚屬Bryum均為多系群，認(rèn)為傳統(tǒng)分類對(duì)一些類群的劃分存在爭(zhēng)議?？梢?jiàn)RAPD可以為真蘚科Bryaceae植物的系統(tǒng)發(fā)育研究提供分子證據(jù)，真蘚科Bryaceae植物的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系有