暖地大葉蘚組織培養(yǎng)的研究.pdf

1、暖地大葉蘚(Rhodobryum giganteum(Hook.) Par.)是一種重要的藥用苔蘚植物，對治療心血管疾病具有很好的療效。本論文以暖地大葉蘚幼嫩莖尖為外植體，應(yīng)用組織培養(yǎng)方法，成功地獲得了無菌的暖地大葉蘚原絲體和植株，在此基礎(chǔ)上，研究了培養(yǎng)基類型、機(jī)械切割、激素、溫度、配子體自身的提取液、培養(yǎng)基組成等對原絲體誘導(dǎo)和生成量的影響，同時比較了組織培養(yǎng)誘導(dǎo)形成的配子體形態(tài)、光合和紅外光譜特點(diǎn)。主要成果如下： 1、通過培養(yǎng)

2、基的篩選發(fā)現(xiàn)改良Knops培養(yǎng)基適合原絲體的擴(kuò)展生長而且能保持兩個月不分化出配子體植株，MS培養(yǎng)基更適合原絲體的分支生長，改良的White培養(yǎng)基中原絲體生長慢同時伴隨植株的分化。 2、運(yùn)用機(jī)械切割法和激素誘導(dǎo)法對原絲體的繁殖進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)機(jī)械切割后原絲體繁殖量在一個月內(nèi)比未切割直接轉(zhuǎn)接的繁殖量增加一倍；低濃度的2.4-D能促進(jìn)莖段上原絲體的發(fā)生。 3、培養(yǎng)基的類型和組成對暖地大葉蘚原絲體擴(kuò)繁有顯著的影響。改良Knops培

3、養(yǎng)基的濃度對原絲體生長影響不大，1/10濃度的改良Knops培養(yǎng)基上生長的原絲體跟全量改良Knops培養(yǎng)基上的原絲體生長無顯著差異。改良Knops培養(yǎng)基組成成分中硼元素對原絲體生長至關(guān)重要，甚至比所有微量元素還重要，從原絲體生長看，不含硼元素的改良Knops培養(yǎng)基上的原絲體比不含微量元素改良Knops培養(yǎng)基上的原絲體更差；改良Knops培養(yǎng)基加適量蔗糖和少量(4g．L-1)瓊脂、pH為6.0-7.0的培養(yǎng)基更適合于暖地大葉蘚原絲體的生長

4、。 4、原絲體初始轉(zhuǎn)接量對暖地大葉蘚原絲體擴(kuò)繁也有顯著影響，本試驗(yàn)中以直徑0.8cm左右的原絲體團(tuán)對原絲體的擴(kuò)繁生長最為有利。 5、實(shí)驗(yàn)表明，暖地大葉蘚原絲體生長對溫度和水分較為敏感，最適溫度是20-22□。植物激素對原絲體生長有較為明顯的作用，6-BA能誘導(dǎo)出愈傷組織團(tuán)，NAA使原絲體變黑，分支生長少但原絲體縱向生長長，含KT的培養(yǎng)基中原絲體一個月后有較多幼芽分化。 6、組織培養(yǎng)條件下形成的暖地大葉蘚植株在形態(tài)

5、上有一定程度的分化，論文描述了組培苗的三種類型：大葉項(xiàng)生型、葉片漸小型和小葉長枝型。不同形態(tài)的植株可以從原絲體分化出植株時就有所不同。跟原絲體生長一樣，植株分支繁殖形態(tài)發(fā)生對溫度也比較敏感，最適溫度也是20□—22□。 7、實(shí)驗(yàn)室條件下測定了暖地大葉蘚生長的光合作用指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)組培植株比野生植株有更高的光飽和點(diǎn)，尤其是形態(tài)上變異明顯的枝長葉小型植株，但光合同化速率不如野生采集的植株高；暖地大葉蘚原絲體的光合同化速率較高，與野生植株

6、相近。暖地大葉蘚的植株在光強(qiáng)大于飽和點(diǎn)后(≥400μ mol m—2s-1)出現(xiàn)光抑制現(xiàn)象。水分對植株的光合作用起著很大影響，水分喪失較多(VPD>10)時光合作用被明顯抑制。植株形態(tài)的變異有利于植株適應(yīng)光照較強(qiáng)(≥350μ mol m—2s-1)下生長，而且變異植株對水分的保持有更好的優(yōu)勢。光合熒光參數(shù)反映出野生采集的植株葉片具有更高的PS□的最大光化學(xué)量子產(chǎn)量和PS□的潛在活性，但實(shí)際光量子效率和光合電子傳遞速率在兩種生長條件下的植