高泌乳素血癥通過Kiss1-GPR54系統(tǒng)影響小鼠卵泡發(fā)育及排卵.pdf

1、背景和目的：
　　高泌乳素血癥（Hyperprolactinemia, HPRL）是指由各種原因引起以外周血泌乳素（Prolactin, PRL）水平異常升高（>25ng/ml）為主要表現(xiàn)的一類常見內(nèi)分泌疾病，常導(dǎo)致女性卵泡發(fā)育及排卵功能障礙，但有關(guān)其抑制卵泡發(fā)育和排卵的作用途徑及機(jī)理還不十分清楚。已有研究提示，PRL可通過作用于促性腺激素釋放激素（GnRH）神經(jīng)元，抑制GnRH釋放，導(dǎo)致FSH和LH分泌減少，從而阻止卵泡的發(fā)育及

2、排卵。然而，現(xiàn)有研究顯示，僅5％PRL受體表達(dá)于GnRH神經(jīng)元，95%PRL受體表達(dá)于Kiss1神經(jīng)元，這提示HPRL可能通過 Kiss1/GPR54系統(tǒng)影響卵泡發(fā)育及排卵。另外，有研究顯示，外周卵巢組織的Kiss1/GPR54系統(tǒng)也參與了卵泡發(fā)育及排卵過程，故本研究擬通過腹腔注射鹽酸甲氧氯普胺(Metoclopramide, MC)誘導(dǎo) HPRL模型，探討 HPRL是否可通過外周卵巢Kiss1/GPR54系統(tǒng)影響小鼠各級卵泡發(fā)育及排卵

3、過程。
　　方法：
　　1、通過免疫組織化學(xué)方法檢測PRL受體與Kiss1蛋白在小鼠卵巢卵泡的共表達(dá)。
　　2、通過 HE染色和輸卵管劃痕方法檢測 HPRL以及外源給予重組的kisspeptin(Kp)對卵泡發(fā)育和排卵的影響。
　　3、通過放射免疫方法檢測HPRL狀態(tài)下，小鼠外周血中PRL、雌二醇（E2）、孕酮（P4）、卵泡刺激素（ FSH）和黃體生成素（LH）的水平變化。
　　4、通過實(shí)時定量PCR技術(shù)，

4、檢測HPRL狀態(tài)下卵巢Kiss1、GPR54、Plat和Serpine1mRNA表達(dá)水平變化。
　　5、通過免疫組織化學(xué)技術(shù)，檢測HPRL狀態(tài)下卵巢Kiss1、GPR54和環(huán)氧化酶-2（COX-2）蛋白表達(dá)水平變化。
　　6、通過離體卵巢組織培養(yǎng)進(jìn)一步檢測PRL對卵泡發(fā)育及Kiss1、GPR54 mRNA表達(dá)水平的影響。
　　結(jié)果：
　　1、免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：PRL受體與Kiss1蛋白共同表達(dá)于卵巢組織卵泡的

5、顆粒細(xì)胞和膜細(xì)胞。
　　2、與對照組相比，腹腔注射鹽酸甲氧氯普胺注射液，可使小鼠外周血漿中PRL水平顯著增加（P<0.05）。
　　3、與對照組相比，HPRL對卵巢重量及卵巢指數(shù)沒有明顯影響（P>0.05），但可導(dǎo)致成熟卵泡數(shù)顯著下降（P<0.01）。同時，伴有小鼠外周血漿中E2、P4、FSH、LH水平顯著降低（P<0.05或0.01）以及卵巢組織Kiss1/GPR54 mRNA和蛋白表達(dá)水平的下降。
　　4、與對照組

6、相比，HPRL可明顯抑制小鼠的促超排卵泡數(shù)(P<0.01)。同時，伴有卵巢組織的Plat和Kiss1/GPR54 mRNA以及COX-2蛋白表達(dá)水平的下降（P<0.05或0.01）。給予外源重組Kisspeptin因子，可使HPRL小鼠的促超排卵泡數(shù)顯著性增加(P<0.01)。同時，伴有卵巢組織的Plat和Kiss1/GPR54 mRNA以及COX-2蛋白表達(dá)水平的明顯上升（P<0.05或0.01）。
　　5、離體卵巢組織培養(yǎng)結(jié)果