足三針促進(jìn)結(jié)腸術(shù)后Cajal細(xì)胞修復(fù)的NO信號途徑機(jī)制研究.pdf

1、外科術(shù)后并發(fā)癥主要以胃腸運(yùn)動(dòng)功能紊亂最常見，術(shù)后往往因胃腸運(yùn)動(dòng)無力、胃腸內(nèi)容物通過障礙而出現(xiàn)腹部脹痛、惡心、嘔吐、排氣排便時(shí)間延長等癥狀，其中以胃腸術(shù)后表現(xiàn)最為明顯，嚴(yán)重影響術(shù)后患者的后期恢復(fù)。胃腸運(yùn)動(dòng)功能紊亂是由圍手術(shù)期間多種因素共同影響所致，因其發(fā)病機(jī)理未完全明確，臨床上缺乏有效的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療方法，故對術(shù)后胃腸運(yùn)動(dòng)功能紊亂的防治越來越受到大家的關(guān)注以及作為研究的熱點(diǎn)。中醫(yī)具有因人而異、辨證論治等治療特色，在用于術(shù)后胃腸功能的調(diào)理方面

2、療效明顯，針灸作為中醫(yī)的外治療法，因其沒有藥物對術(shù)后胃腸道的刺激，安全性高，越來越受到國內(nèi)外外科醫(yī)生的青睞。
　　目的:
　　“足三針”是廣州中醫(yī)藥大學(xué)靳瑞教授總結(jié)和創(chuàng)立的“靳三針”治法中最常用的穴組之一，由足三里、三陰交、太沖三對穴組成，針刺之能疏肝健脾，臨床上運(yùn)用腹部手術(shù)患者能顯著縮短排氣排便時(shí)間。本文在此研究基礎(chǔ)上，運(yùn)用“足三針”針刺結(jié)腸吻合術(shù)造模成功后的SD大鼠，觀察大鼠首次排便時(shí)間，并在針刺的不同時(shí)間段取材，觀察各

3、大鼠小腸推進(jìn)率，檢測結(jié)腸組織中的一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合成酶(NOS)活性以及Cajal細(xì)胞的c-kit表達(dá)情況，與同時(shí)間段未進(jìn)行針刺干預(yù)的模型組相比較，以期從NO氣體信號通路途徑探討針刺足三針改善術(shù)后大鼠胃腸運(yùn)動(dòng)功能的作用機(jī)制;同時(shí)通過觀察和比較針刺干預(yù)時(shí)間的長短對大鼠相關(guān)指標(biāo)的影響是否有差異，為臨床上治療該病療程的選擇上提供依據(jù)。
　　方法:
　　文獻(xiàn)研究主要?dú)w納總結(jié)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對術(shù)后引起胃腸運(yùn)動(dòng)功能紊亂病因、病理的

4、研究和治療方法，以及古現(xiàn)代中醫(yī)對該病病因病機(jī)的認(rèn)識、分析以及主要治療方法。
　　實(shí)驗(yàn)研究主要采取結(jié)腸吻合術(shù)制造胃腸運(yùn)動(dòng)功能紊亂的模型，并按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要求隨機(jī)分為正常組、模型組、針刺組，后兩組根據(jù)干預(yù)的時(shí)間不同，組內(nèi)又隨機(jī)分為3天模型組、5天模型組、10天模型組和3天針刺組、5天針刺組、10天針刺組，每組各10只，總共7組。針刺每天傍晚進(jìn)行，并記錄各組手術(shù)后的首次排便時(shí)間，各組在特定時(shí)間段后的第2天，抽取1ml墨水對大鼠進(jìn)行灌胃，半

5、小時(shí)后處死剖腹觀察各組大鼠的小腸推進(jìn)率，取結(jié)腸吻合術(shù)口處約1cm長結(jié)腸，行NO、NOS、c-kit指標(biāo)的檢測。
　　結(jié)果:
　　1、首次排便觀察結(jié)果;針刺組術(shù)后首次排便時(shí)間短于模型組（P＜0.01）;
　　2、小腸推進(jìn)率觀察結(jié)果:與正常組比較，3天模型組、5天模型組、10天模型組、3天針刺組的小腸推進(jìn)率均低于正常組(P＜0.01)，5天針刺組、10天針刺組與正常組無差異(P＞0.05);各針刺組之間的比較，3天針刺組低

6、于5天、10天針刺組的小腸推進(jìn)率(P＜0.01)，5天針刺組與10天針刺組相比無差異（P＞0.05）;各模型組之間比較，3天模型組與5天模型組無差異(P＞0.05)，5天模型組低于10天模型組（P＜0.05):針刺組與模型組相比較，10天模型組與3天針刺組相比無差異(P＞0.05)，而低于5天針刺組(P＜0.01)。
　　3、NO含量的檢測結(jié)果:
　　采用硝酸還原酶法檢測各組大鼠結(jié)腸組織中NO的含量，與正常組比較，模型組和針

7、刺組的NO含量均高于正常組(P＜0.05);各模型組之間比較，3天模型組NO含量均高于5天、10天模型組（P＜0.05)，5天模型組高于10天模型組（P＜0.01）;各針刺組之間相比較，3天針刺組NO含量均高于5天、10天針刺組（P＜0.01），5天針刺組高于10天針刺組（P＜0.01）;針刺組與模型組之間相比較，3天針刺組與10天模型組NO含量無差異(P＞0.05)，5天針刺組低于10模型組(P＜0.05)。
　　4、NOS酶活

8、性的檢測結(jié)果:采用L-精氨酸(L-Arg)法測定一氧化氮合成酶(NOS)酶活性，NOS根據(jù)是否需要依賴細(xì)胞內(nèi)鈣離子生理性調(diào)節(jié)又可以分為結(jié)構(gòu)型一氧化氮合成酶(cNOS)和誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)。比較各組大鼠NOS(TNOS、iNOS、cNOS)酶活性表達(dá)，與正常組相比各組TNOS、iNOS酶活性均高于正常組，cNOS均低于正常組（P＜0.05）;隨著時(shí)間的增加，模型組間TNOS、iNOS酶活性比較，3天組高于5天組，5天組高于1

9、0天組（P＜0.05），模型組間cNOS酶活性比較，3天組低于5天組，5天組低于10天組（P＜0.05）;針刺組間TNOS、iNOS酶活性比較，3天組高于5天組，5天組高于10天組(P＜0.05)，針刺組間cNOS酶活性比較，3天組與5天組相比無明顯差異（P＞0.05），5天組低于10天組（P＜0.01）;模型組與針刺組各組間相比較，cNOS、iNOS酶活性3天針刺組與10天模型組無差異(P＞0.05)，TNOS酶活性5天針刺組與10天

10、模型組相比無差異(P＞0.05)。
　　5、各組c-kit表達(dá)的平均吸光值比較結(jié)果:與正常組比較，3天模型組、5天模型組、10天模型組、3天針刺組均低于正常組(P＜0.01);各模型組之間相比較，3天模型組低于5天模型組，5天模型組低于10天模型組(P＜0.05);各針刺組比較，3天針刺組均低于5天、10天針刺組(P＜0.01)，5天針刺組與10天針刺組相比較無意義(P＞0.05);針刺組與模型組相比較，3天針刺組與10天模型組相

11、比較無差異(P＞0.05)，5天針刺組高于10天模型組(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.術(shù)后早期介入“足三針”針刺干預(yù)可以明顯縮短術(shù)后首次排便時(shí)間。
　　2.(1)術(shù)后針刺可以改善大鼠進(jìn)食后的小腸推進(jìn)活動(dòng)，增強(qiáng)胃腸活動(dòng)功能;(2)結(jié)腸吻合術(shù)后模型組大鼠有自愈傾向，隨著時(shí)間延長大鼠小腸推進(jìn)活動(dòng)增強(qiáng)，但與針刺組相比較，恢復(fù)速度較慢，且針刺第五天時(shí)小腸推進(jìn)活動(dòng)與正常組無明顯差異;
　　3.結(jié)腸吻合術(shù)可以損傷胃腸起

12、搏Cajal細(xì)胞，術(shù)后該細(xì)胞恢復(fù)與其生存微環(huán)境中的NO含量相關(guān)，結(jié)腸吻合術(shù)會(huì)造成結(jié)腸組織NO含量超載，早期針刺干預(yù)能抑制NO的生成，隨著針刺干預(yù)時(shí)間增加，可逐漸降低結(jié)腸吻合口組織中的NO含量;
　　4.NO的生成量與NOS酶活性相關(guān)，在手術(shù)應(yīng)激條件下，短時(shí)間內(nèi)會(huì)促進(jìn)iNOS（誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶）、抑制cNOS（結(jié)構(gòu)型一氧化氮合成酶）的酶活性表達(dá)，針刺可降低iNOS的酶活性，促進(jìn)cNOS的酶活性表達(dá);隨著針刺時(shí)間的延長，TNOS和

13、iNOS酶活性均降低，但針刺組iNOS降低幅度明顯高于相同時(shí)間段的模型組，cNOS增長趨勢高于模型組，但針刺第10天時(shí)仍未恢復(fù)正常;
　　5.c-kit蛋白是Cajal細(xì)胞發(fā)育和功能表現(xiàn)的標(biāo)志，針刺能降低結(jié)腸吻合術(shù)對Cajal細(xì)胞的損傷程度，并能促進(jìn)c-kit的表達(dá)，促進(jìn)術(shù)后Cajal細(xì)胞的再生及功能恢復(fù);
　　6.針刺干預(yù)結(jié)腸吻合術(shù)后大鼠可能通過促進(jìn)起保護(hù)作用cNOS的酶活性表達(dá)，降低起抑制作用iNOS酶活性的表達(dá)，共同調(diào)