糖皮質激素保護腎小球足細胞損傷及促進其損傷后修復機制.pdf

1、研究背景:足細胞是局灶節(jié)段腎小球硬化(FSGS)腎組織病變形成的主要受損靶細胞。研究表明，足細胞受到損傷后，發(fā)生凋亡、自噬、壞死，導致其數目減少。腎小球內足細胞數目減少直接導致了蛋白尿的發(fā)生和腎小球硬化形成，最終影響腎功能。近年來，隨著腎小球壁層上皮progenitor細胞的發(fā)現，在腎小球足細胞損傷修復研究領域，足細胞再生修復機制引起人們重視。足細胞損傷后，是否發(fā)生壁層上皮細胞向足細胞轉分化，增生修復脫落的足細胞，防止腎小球硬化發(fā)生，是

2、腎小球再生修復研究的重點。
　　 糖皮質激素類藥物被廣泛用于治療由足細胞病變導致的腎病綜合征，例如FSGS。然而，該領域尚缺乏糖皮質激素類藥物是否可直接作用于腎小球固有細胞，促進足細胞損傷再生修復的機制研究。
　　 因此，本課題的總研究目的將探討糖皮質激素對足細胞的直接保護作用，以及是否具有促進其再生修復作用。研究將證實，該作用是否與壁層上皮progenitor細胞向足細胞轉分化有關。
　　 本研究由兩部分組成:

3、
　　 第一部分:體內動物試驗觀察糖皮質激素治療FSGS模型小鼠對其足細胞保護和損傷后修復的作用。
　　 目的:通過體內動物試驗證實，糖皮質激素是否具有足細胞保護作用，以及糖皮質激素是否能促進腎小球足細胞再生，而該過程與增加腎小球壁層上皮progenitor細胞有關。
　　 方法:
　　 1.通過具有足細胞毒性的抗腎小球足細胞抗體誘導B6129SV/j小鼠建立臨床表現為蛋白尿，腎臟病理表現為局灶節(jié)段性腎小

4、球硬化的小鼠動物模型。
　　 2.在模型建立后第3天，經皮下注射糖皮質激素，分別與治療2周、4周后行活檢，獲取腎組織。
　　 3.重點通過免疫組織化學染色方法，觀察腎小球病理形態(tài)學變化，足細胞數目增減情況，以及腎臟固有細胞凋亡和腎小球壁層上皮細胞分化情況。
　　 結果:
　　 1.連續(xù)兩天抗體注射誘導后，腎小球足細胞與模型第3天已出現明顯下降，糖皮質激素治療2周和4周后，足細胞數目得到部分恢復，腎小球硬化

5、程度減輕，而對照組無此現象。
　　 2.糖皮質激素治療腎小球足細胞caspase-3表達明顯下降，首次于體內研究發(fā)現糖皮質激素具有抗足細胞凋亡作用。
　　 3.糖皮質激素治療組腎臟足細胞的progenitor細胞，定義為同時表達足細胞和壁層上皮細胞特有蛋白，其數目明顯多于對照組;并同時觀察到糖皮質激素治療組壁層上皮細胞出現ERK信號通路磷酸化活躍。
　　 4.糖皮質激素治療組模型動物，腎小球內壁層上皮細胞表達CD

6、44明顯降低，而此現象與腎小球硬化程度成正相關，提示糖皮質激素可能通過抑制CD44表達，而抑制壁層上皮細胞活化，從而減輕上皮細胞向間充質細胞轉分化，參與硬化病變的形成。
　　 結論:以足細胞損傷為特征的FSGS模型小鼠動物試驗證實，糖皮質激素能夠緩解足細胞損傷，促進其再生修復。此過程可能與糖皮質激素抗足細胞凋亡，通過促進腎小球壁層上皮細胞ERK信號通路活化，向足細胞轉分化，參與其再生修復過程有關。
　　 第二部分:體外細

7、胞培養(yǎng)試驗觀察糖皮質激素促進腎小球壁層上皮細胞表達足細胞蛋白檢測。
　　 目的:通過體外細胞培養(yǎng)試驗，觀察糖皮質激素是否可誘導腎小球壁層上皮細胞表達足細胞特有蛋白。
　　 方法:
　　 1.通過細胞培養(yǎng)試驗，建立小鼠腎臟壁層上皮細胞系。
　　 2.37℃培養(yǎng)箱中，2％FBS細胞培養(yǎng)液培育細胞14天后，加入不同濃度的(1-20μM)地塞米松，繼續(xù)培育24-72小時。
　　 3.收獲細胞后，行免疫細胞

8、化學染色，觀察成熟壁層上皮細胞蛋白PAX2和成熟足細胞蛋白synaptopodin表達情況。
　　 結果:
　　 1.不同濃度和不同培育時間的含地塞米松細胞培養(yǎng)液均能促使壁層上皮細胞表達足細胞特有蛋白synaptopodin，而對照組無此現象。
　　 2.低濃度地塞米松(5μM)促使synaptopodin表達作用明顯，且該現象可發(fā)生于24小時內。
　　 結論:
　　 體外細胞培養(yǎng)試驗發(fā)現糖皮質激