熒光量子點提高多輪基因擴增效率的研究及機理探討.pdf

1、本課題通過將納米材料量子點與多輪基因擴增結(jié)合，以此來達到提高多輪擴增輪數(shù)，以及擴增特異性的效果。量子點在高保真的Pfu DNA聚合酶所催化的PCR體系中下可以產(chǎn)生明顯的熱啟動效果，并且在50℃溫浴1h的情況下依然能產(chǎn)生清晰的目的條帶。在本課題中首先選用3種不同來源的模板以及不同GC含量的引物進行基于量子點的多輪基因擴增，探究擴增特異性的影響因素。在以海洋污損生物藤壺M8模板的多輪擴增實驗中，量子點在實驗中的使用使得擴增輪數(shù)從3輪有效擴增

2、提高到了8輪，通過對比相同擴增條件下的常規(guī)多輪基因擴增以及基于納米金的多輪基因擴增方法的擴增效果，進一步驗證了量子點對多輪基因擴增特異性的提高具有顯著的效果。通過對比量子點作用下的不同模板，低濃度模板的多輪基因擴增效果，以及不同表面修飾的量子點對多輪基因擴增效果的影響，量子點均表現(xiàn)出了穩(wěn)定且優(yōu)異的增效作用，在這基礎(chǔ)上通過將擴增產(chǎn)物測序結(jié)果比對，顯示出了量子點所作用的多輪基因擴增具有高度的忠實性，這對能否作為實際應(yīng)用具有重要的意義。

3、>　　量子點在由高保真Pfu DNA聚合酶所催化的多輪基因擴增中能產(chǎn)生明顯的熱啟動效果，而在普通的Taq聚合酶催化的擴增體系中卻沒有顯著的差別，因此，量子點與Pfu DNA聚合酶之間的相互作用作為主要的機理研究對象。利用瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)初步檢測發(fā)現(xiàn)PCR體系中的各個組分均能夠與量子點產(chǎn)生一定的作用，但量子點與Pfu DNA聚合酶的之間的影響最大，之后采用紫外可見分光光譜法以及傅里葉紅外光譜法進行深入研究分析更加證實了量子點與Pfu D