中心體定位的具有原癌基因?qū)傩缘娜嗽葱禄騝epo的功能研究.pdf

1、Cepo(centrosomal protein oncogene)是我們實(shí)驗(yàn)室從人胎肝cDNA文庫(kù)中克隆到的一個(gè)未知功能的新基因.cepo在進(jìn)化過程中高度保守,但各物種中的同源基因目前均無任何功能信息.人cepo基因的染色體定位為10q24.2,其基因組序列大約為14kb,cepo通過選擇性剪接產(chǎn)生cepo-A和cepo-B兩種轉(zhuǎn)錄本,兩種轉(zhuǎn)錄本大小相同,為1.5kb.cepo-A由4個(gè)外顯子組成、cepo-B由5個(gè)外顯子組成;cep

2、o-A和cepo-B的所有內(nèi)含子/外顯子剪接邊界均符合典型的GT/AG剪接模式.cepo基因的組織表達(dá)譜結(jié)果表明,它具有類似看家基因的廣泛表達(dá)的特征;cepo-A和cepo-B分別編碼99個(gè)142個(gè)氨基酸.在這兩種蛋白質(zhì)異構(gòu)體的C末端均存在一個(gè)亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域.CEPO大部分定位于細(xì)胞質(zhì)中,一部分定位于中心體上;其中心體定位表現(xiàn)出不依賴于細(xì)胞周期變化的方式,即在細(xì)胞周期的各個(gè)時(shí)期(G1-S-G2-M),CEPO都定位于中心體上.CEPO

3、在NIH3T3細(xì)胞中異源過表達(dá)可引起此細(xì)胞的中心體擴(kuò)增.通過軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)、裸鼠皮下細(xì)胞接種實(shí)驗(yàn),我們證明CEPO的這種異源過表達(dá)還可以引起被穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的NIH3T3細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化.運(yùn)用免疫組化組織芯片實(shí)驗(yàn),我們證明:CEPO在某些腫瘤組織中的表達(dá)水平明顯高于各自相應(yīng)的正常對(duì)照組織表明CEPO具有原癌基因的屬性,該基因的名稱——cepo即由此而來.利用CEPO做誘餌蛋白篩選人睪丸cNDA文庫(kù)得到大量陽性克隆.通過進(jìn)一步的體內(nèi)、外相互