雞蛋白溶菌酶結(jié)晶學(xué)研究.pdf

1、蛋白質(zhì)是生命的基礎(chǔ)物質(zhì)。用X-射線衍射法確定蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)對(duì)生物體進(jìn)程的理解和指導(dǎo)新型藥物的設(shè)計(jì)等有十分重要的意義。然而，得到高質(zhì)量的單晶是當(dāng)前蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)確定的瓶頸。雞蛋白溶菌酶(簡(jiǎn)稱HEWL)由于其穩(wěn)定性，溶解性和易結(jié)晶性，被結(jié)晶學(xué)家當(dāng)作研究結(jié)晶理論的模板。為了進(jìn)一步理解蛋白質(zhì)結(jié)晶的理論，我們以HEWL為對(duì)象，研究不同的環(huán)境對(duì)其結(jié)晶行為的影響，通過X-射線衍射在低溫下收集了5種HEWL晶體的數(shù)據(jù)，并對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了解析。 通過

2、對(duì)HEWL的四方晶體結(jié)晶條件的優(yōu)化，我們研究了各種因素對(duì)四方HEWL結(jié)晶的影響，并確定了pH值和SmCl<,3>是影響結(jié)晶的兩個(gè)重要因素。 此外，我們發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)文獻(xiàn)沒有報(bào)道過的HEWL結(jié)晶條件。在37℃，高濃度的(NH<,4>)<,3>PO<,4>鹽，咪唑鈉緩沖溶液pH 6.1，加入DMSO和Mgcl<,2>混合添加劑，得到了高質(zhì)量的晶體。添加劑DMSO能夠優(yōu)化晶體生長的形態(tài)。單晶衍射結(jié)果表明這可能是雞蛋白溶菌酶的一個(gè)新的晶型。

3、它的結(jié)構(gòu)解析還沒有完成。 在37℃下，1.0 M酒石酸鈉，Hepes緩沖溶液，pH 7.5意外得到了四方的HEWL晶體。此晶體的三維結(jié)構(gòu)與HEWL-NaCI一致，空間群都是．P4<,3>2<,1>2。這個(gè)結(jié)果否定了之前報(bào)道的HEWL在25℃以上任何條件下都會(huì)以穩(wěn)定的正交晶型結(jié)晶的結(jié)論。 用大量的金屬氯化物代替氯化鈉的方法，我們得到了系列與金屬共結(jié)晶的HEWL晶體。從HEWL-NaCI，HEWL-CuCl<,2>，HEWL