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文檔簡介
1、溶菌酶(lysozyme)具有抗菌、消炎、抗病毒等作用,已廣泛應用于食品、醫(yī)藥、輕工業(yè)及生物工程等生產領域。目前溶菌酶的生產方式主要是從雞蛋清中提取,分離成本高,限制了溶菌酶在畜禽等低附加值產業(yè)的應用。因此,尋找一種新的溶菌酶生產方式迫在眉睫。
本課題采用山東大學構建的一支甲醇誘導型重組畢赤酵母菌株NCY-2發(fā)酵表達雞蛋清溶菌酶(HEWL)。分別在搖瓶水平和10 L機械攪拌式生物反應器水平研究了NCY-2菌株的最適生長和表達條
2、件,確定了HEWL在10 L反應器水平的異源表達工藝。主要研究內容及結果如下:
(1)在搖瓶水平上,確定了適合NCY-2生長的BSM培養(yǎng)基四種主要組分的濃度:(NH4)2SO45.0 g/L、甘油30 g/L、CaSO40.93 g/L、PTM1(微量元素)4 mL/L;在此基礎上優(yōu)化了NCY-2的最適生長條件:pH值5.0,溫度30℃,接種量8%;最后在BMGY/BMMY培養(yǎng)基中,初步確定了NCY-2的最適表達條件:甲醇濃度
3、2%,誘導時間96 h,誘導溫度20℃,誘導pH3.5。
?。?)在10 L生物反應器水平上,以搖瓶實驗結果為基礎,通過甘油流加的方式,實現了菌株NCY-2的高密度培養(yǎng),發(fā)酵液中的菌體干重可達到41.84 g/L,比原結果高出了1.3%,菌體生長時間縮短了3 h。
?。?)在10 L生物反應器水平上,按照上述高密度培養(yǎng)工藝,菌株NCY-2完成生長后,研究了甲醇流加對HEWL表達的影響,確定了該體系甲醇的流加方式:誘導開始
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