人源NTR1穩(wěn)轉細胞系的構建及其拮抗劑的篩選.pdf

1、神經(jīng)降壓素受體-1（neurotensin receptor-1, NTR1）屬于G蛋白偶聯(lián)受體（G-proteincoupled receptor, GPCR）A家族的成員，具有七次跨膜的受體結構域。NTR1在細胞信號轉導中起著重要的作用，和多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關，參與了乳腺癌，非小細胞肺癌，前列腺癌，胰腺癌等多種惡性腫瘤的生長、增殖、侵襲和轉移。神經(jīng)降壓素（Neurotensin, NT）是內源性多肽，由十三個氨基酸殘基組成，主

2、要分布在腦和胃腸道，與多種中樞和外周的調節(jié)作用有關，因為位于神經(jīng)組織又具有降血壓的作用，故命名為神經(jīng)降壓素。
　　NT屬于NTR1的天然配體，當受體NTR1識別配體NT后會通過Gq蛋白介導的信號通路，增加細胞內鈣離子的濃度，對于NTR1拮抗劑的篩選是重要的依據(jù)，NT配體可以作為陽性對照。SR48692是已知的對NTR1具有較好拮抗作用的小分子化合物，可以作為陰性對照用于小分子拮抗劑的篩選。
　　鼠源NTR1蛋白的三維晶體結構

3、于2012年被成功解析，這使得基于受體結構的虛擬篩選成為可能。本課題首先采用基于配體的藥效團模型和分子指紋的方法對課題組前期得到的針對NTR1靶標的10000個小分子的數(shù)據(jù)庫進行虛擬篩選，得到候選化合物；然后構建了CHO/NTR1穩(wěn)轉細胞系；使用多功能酶標儀Flexstation3，對候選化合物進行細胞水平的鈣流檢測，測試其生物活性，最終得到了四個具有較好拮抗活性的化合物。可以對這4個化合物進行進一步的優(yōu)化改造使其成為先導化合物，用于與