T淋巴細(xì)胞γ-H2AX微流控芯片免疫染色技術(shù)研究.pdf

1、微流控芯片(Microfluidic chip)是一種微型化、集成化的技術(shù)平臺(tái)。它能把整個(gè)生物或化學(xué)過(guò)程整合到一個(gè)只有幾平方厘米的芯片上，并且易于自動(dòng)化操控。應(yīng)用微流控技術(shù)進(jìn)行實(shí)時(shí)現(xiàn)場(chǎng)生物標(biāo)志物監(jiān)測(cè)是作為健康評(píng)估的一個(gè)有前景的技術(shù)。γ-H2AX熒光標(biāo)記技術(shù)能夠檢測(cè)T淋巴細(xì)胞的輻射損傷，可以為實(shí)施現(xiàn)場(chǎng)評(píng)估輻射損傷提供重要的監(jiān)測(cè)靶目標(biāo)。本研究為實(shí)現(xiàn)在芯片上自動(dòng)化操控T淋巴細(xì)胞進(jìn)行γ-H2AX免疫熒光標(biāo)記的過(guò)程，研究了免疫磁珠結(jié)合淋巴細(xì)胞在芯

2、片上的驅(qū)動(dòng)作用、γ-H2AX免疫熒光標(biāo)記芯片的設(shè)計(jì)和優(yōu)化、利用人CD4細(xì)胞進(jìn)行UVC紫外線(xiàn)輻射產(chǎn)生DNA的γ-H2AX熒光標(biāo)記及其在芯片上實(shí)現(xiàn)特異性標(biāo)記反應(yīng)。
　　研究表明，利用永久磁鐵帶動(dòng)2.8μm磁珠既滿(mǎn)足磁鐵帶動(dòng)CD4淋巴細(xì)胞在芯片上的拖動(dòng)，又不影響輻照產(chǎn)生的γ-H2AX相對(duì)熒光強(qiáng)度與輻照劑量的線(xiàn)性關(guān)系。本研究?jī)?yōu)化了在芯片上實(shí)現(xiàn)CD4淋巴細(xì)胞γ-H2AX免疫的反應(yīng)池和間隔池的數(shù)量分別為6個(gè)和5個(gè)，確立了各個(gè)反應(yīng)池的反應(yīng)試劑量

3、，確立了細(xì)胞與磁珠結(jié)合比為1/10，細(xì)胞上樣量為2×105。在芯片上通過(guò)永久磁鐵拖動(dòng)結(jié)合了磁珠的淋巴細(xì)胞實(shí)現(xiàn)了對(duì)CD4淋巴細(xì)胞γ-H2AX免疫特異性熒光標(biāo)記。通過(guò)對(duì)不同劑量(0、16、32、64J/m2)的UVC紫外輻照后的淋巴細(xì)胞的γ-H2AX相對(duì)熒光強(qiáng)度分析，獲得的相關(guān)系數(shù)為0.9517，證實(shí)利用該技術(shù)可以監(jiān)測(cè)到輻射損傷與輻照劑量的線(xiàn)性關(guān)系。
　　本研究可以為微流控芯片自動(dòng)免疫熒光染色裝置以及便攜式細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)儀器的開(kāi)發(fā)提供