變應(yīng)原sIgE的納米磁微?；瘜W(xué)發(fā)光測(cè)定方法研究.pdf

1、目的：建立用于臨床變應(yīng)原檢測(cè)的納米磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法，并驗(yàn)證其靈敏度、準(zhǔn)確度、特異性、重復(fù)性以及穩(wěn)定性等性能；為臨床應(yīng)用提供一種準(zhǔn)確、快速、同時(shí)可針對(duì)多種變應(yīng)原檢測(cè)且適合我國(guó)患者應(yīng)用的檢測(cè)方法。
　　方法：采用流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果選擇臨床發(fā)病率高且病情較嚴(yán)重的變應(yīng)原作為本次研究對(duì)象；采用信噪比的評(píng)估方式確定化學(xué)發(fā)光底物液試劑的最佳濃度、合適的免疫反應(yīng)條件、合適粒徑的納米磁微粒和鏈霉親和素磁微粒最佳工作濃度以及生物素化變應(yīng)原最佳使用濃度以

2、及HRP標(biāo)記鼠抗人IgE最佳工作濃度；根據(jù)WHO對(duì)變態(tài)反應(yīng)性疾病的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線合適的濃度范圍；根據(jù)“體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則”對(duì)所建立方法的性能進(jìn)行評(píng)價(jià)；并依據(jù)“體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則”對(duì)此方法進(jìn)行臨床評(píng)估。
　　結(jié)果：1、化學(xué)發(fā)光反應(yīng)體系中：發(fā)光底物A液中魯米諾濃度為0.4mg/ml、發(fā)光底物 B液中過(guò)氧化氫脲濃度為0.2mg/ml。此發(fā)光反應(yīng)體系對(duì)HRP的敏感性很高，可檢測(cè)到HRP的最小量為0.01n

3、g/ml。在免疫反應(yīng)中，加入底物A液和B液后室溫避光反應(yīng)5分鐘檢測(cè)，但在5-30分鐘內(nèi)檢測(cè)數(shù)值均有效。2、研究課題釆用二步法，且每一步最佳的免疫反應(yīng)條件為37℃孵育15分鐘。3、納米磁微粒選擇粒徑100nm用于此研究課題效果最好，鏈霉親和素磁微粒的最佳工作濃度為2.5μg/ml;12種生物素化變應(yīng)原分別具有最佳使用濃度；鼠抗人IgE-HRP的最佳工作濃度為0.25μg/mlo4根據(jù)臨床需求研究課題選擇0.35100IU/ml范圍作為標(biāo)準(zhǔn)

4、曲線。5、研究課題所建立的變應(yīng)原檢測(cè)方法的靈敏度、準(zhǔn)確度、特異性、重復(fù)性以及穩(wěn)定性均符合國(guó)家對(duì)體外診斷試劑的要求。6、根據(jù)1202例臨床試驗(yàn)結(jié)果，所研究方法與目前Uni-CAP結(jié)果的診斷一致率在90％以上，而且通過(guò)本次臨床試驗(yàn)可知蒿屬花粉和戶塵滿是我國(guó)最主要的致敏變應(yīng)原。
　　結(jié)論：1、建立了納米磁微粒化學(xué)發(fā)光法，且其靈敏度、準(zhǔn)確度、特異性、重復(fù)性及穩(wěn)定性均達(dá)到了設(shè)計(jì)的要求，符合國(guó)家規(guī)定，更能滿足臨床需求。2、通過(guò)臨床試驗(yàn)可知所建